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前言 主要组织相容性复合物（major histocompatibilty complex，MHC）在人类又称为白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA），位于6号染色体短臂上，编码几组免疫分子，其中HLA—Ⅰ类抗原是由两条多肽链组成的跨膜糖蛋白，一条为多态性重链，主要是HLA—A、B、C；另一条为β2微球蛋白，称为轻链。HLA—Ⅰ类抗原为经典的移植抗原，分布于绝大多数有核细胞的表面，仅在中枢神经元、精子、滋养层细胞等难于检测到其存在。其主要功能是将内源性抗原肽呈递给细胞毒性T淋巴细胞，在细胞毒性T淋巴细胞介导的肿瘤免疫排斥反应中起重要作用。 目前认为恶性肿瘤的发生、生长和转移是其逃脱机体免疫监控的结果。通过免疫组化研究发现HLA—Ⅰ类抗原在多种肿瘤中都存在着不同程度的缺失，并且与肿瘤的临床病理有一定的相关性。肿瘤细胞中HLA—Ⅰ类抗原部分和全部缺乏帮助肿瘤细胞逃脱细胞毒性T淋巴细胞和自然杀伤细胞的免疫监视，使肿瘤得以生长转移。目前已发现HLA—Ⅰ类抗原在黑色素瘤、宫颈癌、胃癌和结肠癌等肿瘤中表达下降，且与肿瘤的侵袭和进展相关。关于肺癌中HLA—Ⅰ抗原表达的研究较少，而且观点尚不完全一致。本研究利用抗HLA—A、B、C单克隆抗体W6／32，以免疫组化技术检测肺癌及其淋巴结转移灶中HLA—A、B、C抗原的表达情况，并探讨其临床意义。 实验材料 1、病例及组织标本 选取 67例从 2001，5刁001，10在中国医大一院确诊为原发性肺癌，并行手术切除，淋巴结廓清的患者，病人术前均未行放化疗及免疫治疗。其中男48例，女19例，年龄32一8岁，平均58．3L6．6岁。鳞癌27例，腺癌34例，小细胞癌6例。术后立即将肿瘤组织及相应正常肺组织（距肿瘤 5 cm以上）和廓清的淋巴结用液氮处理，一80℃冻存。 人主要试剂 一抗是由美国Dako公司提供的W讥。单克隆抗体：主要抗HLA一AJ人重链抗原决定基。 实验方法 1、免疫组化染色 每个冻存组织被制成4urn冰冻切片，丙酮固定10分钟后充分风干，0．3％Hp。甲醇室温浸泡 20分钟以灭活内源性过氧化物酶，l：50正常血清封闭 20分钟，PBS稀释一抗风月一：200)室温孵育二小时，1：100生物素标记二抗人gG)室温孵育30分钟，1：100 S—P溶液室温孵育20分钟，DAB显色3一分钟，苏木素复染，脱水，透明，中性树胶固定，封片。PBS代替一抗做阴性对照。 2、结果判定 如细胞膜呈现清晰的棕色反应则该细胞为阳性细胞。肿瘤组织以细胞是否被染色分为阴性和阳性，阳性又根据染色强度及阳性细胞比例分为表达减弱（＋）和表达正常(＋十人如果肿瘤组织中阳性肿瘤细胞数Z50％，则被视为(＋十厂如果＜50叽，被视 ·2·为(十八染色强度如果与正常对照肺组织相似则被视为(＋十人如果明显低于正常肺组织则视为(十人最终结果是由两位病理医师用双盲法排u观察每例切片所获得的一致意见。 3、统计学处理：采用卡方检验，P＜O．05被设为显著性标准。 结 果 HLA—A在人抗原在67例正常肺组织中均呈明显的阳性表达。阳性组织包括肺泡上皮细胞，支气管上皮细胞，纤维母细胞，血管内皮细胞和淋巴细胞等。而在肿瘤细胞中表达则下降明显瞩＜0．m1人其中6例小细胞肺癌中＊LA一A在上抗原表达均完全缺失，缺失率达11％。在鳞癌和腺癌中HLA一AJ人抗原表达下降率分别为 66．6％（18／2）和 38．2％(l04入H者差别有统计学意义河＜0．05人 对非小细胞肺癌的临床病理因素与HLA——A8人的表达下调进行研究，发现原发灶中HLA—A8人的低表达与患者年龄。性别J瘤大小、淋巴结转移、分期均无明显相关性，只是随着肿瘤分化程度的下降，HLA—A上人的表达也明显降低。低分化肿瘤中＊＊一A在人抗原表达下降率明显高于高分化者，二者有统计学差异（P＜0．05）。 对23例鳞癌和腺癌的淋巴结转移灶中HLA——A人人抗原的表达进行研究，并与之原发灶中的HLA—A在人的表达结果进行对照，发现转移灶中HLA—A8人抗原的表达普遍比原发灶中降低（P＜0．05）。 讨 论 机体的免疫系统在控制肿瘤的发生和发展中具有重要的作 ·3·用。机体清除突变的恶性细胞主要依赖于细胞毒性T淋巴细胞和自然杀伤细胞。而HLA—I类抗原的限制性抗原递呈作用，即肿瘤抗原必须与HLA—l类抗原结合才能被机体识别，是激活细胞毒性T淋巴细胞的前奏。因此肿瘤细胞表面HLA—A上J抗原的异常改变是导致肿瘤免疫原性低下的重要原因之一。HLA一A在(抗原主要是在细胞毒性T淋巴细胞介导的肿瘤免疫排斥中起关键性作用。 近年来大量的临床研究证实HLA——I类抗原的表达在多种上皮来源的恶性肿瘤中均发生明显降低。但在肺癌中的研究结果尚不完全一致。Doyle等认为在小细胞肺癌中HLA—I抗原表达明显低下?