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目的：趋化因子是一类8－10kDa的多肽超家族,通过与其相应受体及粘附分子的特异结合,可介导特定细胞亚群发生定向迁移。近年来,趋化因子受体在肿瘤转移中的作用得到广泛关注,尤其是SDF-1/CXCR4生物轴在多种肿瘤的生长、播散、器官特异性转移及肿瘤免疫抑制中发挥着重要的作用。乳腺癌经常发生转移的组织或器官,如肺、骨和淋巴结中高表达SDF－1,而其受体CXCR4高表达于人乳腺癌细胞中。SDF－1由骨髓成骨细胞、成纤维细胞和血管内皮细胞分泌,但仅在骨髓分泌具有活性的SDF－1。通过对晚期肺癌、乳腺癌和卵巢恶性肿瘤转移的研究表明,CXCR4的配体SDF－1在某器官的高水平表达代表癌细胞首先转移至该目的地。SDF-1/CXCR4使乳腺癌细胞的侵袭力增加,SDF-1/CXCR4在腋窝淋巴结阳性患者的表达高于淋巴结阴性患者,而且与患者生存相关。因此,CXCR4可能是人类肿瘤治疗的一个潜在的靶位,对其进行更加深入的研究可能具有重要意义。本实验利用小干扰RNA(siRNA)技术,下调乳腺癌细胞系MDA-MB-231基因CXCR4的表达,再通过一系列迁移、增殖实验判断其是否可抑制癌细胞转移及生长,从而寻找乳腺癌新的治疗靶点。方法：第一部分：1.常规培养乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231,用Western-blot方法筛选高表达CXCR4的乳腺癌细胞系。2. siRNA下调CXCR4表达。通过查找文献,选择CXCR4-siRNA序列(5’-UAAAAUCUUCCUGCCCACCTT-3’),分别设实验转染组和阴性对照组。合成siRNA并进行转染。3. Western-blot方法检测CXCR4-siRNA效果提取实验转染组与阴性对照组蛋白,SDS－聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离,转膜,加入CXCR4抗体杂交,ECL法检测蛋白表达。第二部分：利用细胞增殖实验和细胞划痕实验检测CXCR4-siRNA实验组与阴性对照组细胞的增殖及迁移功能。以验证CXCR4-siRNA对细胞增殖和迁移功能的影响。结果：1.高表达CXCR4的乳腺癌细胞系的筛选Western-blot结果显示,乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞CXCR4表达水平明显高于MCF-7,故选择MDA-MB-231细胞作为本实验的研究对象。2. Western-blot方法检测CXCR4-siRNA效果MDA-MB-231细胞在经过siRNA处理后,CXCR4表达水平明显降低,说明siRNA起到了下调CXCR4表达量的作用,靶点设计合理。3.将转染组细胞与对照组细胞在基数相近且生长环境完全一致的情况进行增殖实验,结果显示,转染组细胞增殖速度小于对照组(P<0.01),差别具有统计学意义。4. CXCR4-siRNA对MDA-MB-231细胞迁移能力的影响由划痕实验结果可以看到,阴性对照组细胞在24 h后已有明显迁移现象,40 h后划痕全部消失,而转染组细胞迁移速度明显小于对照组,96h后仍有划痕未长满。结论：本实验通过siRNA下调了乳腺癌细胞系MDA-MB-231的CXCR4表达。并进一步通过增殖实验发现,下调了CXCR4表达的细胞增殖能力比阴性对照组明显下降(P<0.01),说明阻断CXCR4/SDF-1轴能够抑制乳腺癌细胞的增殖作用,且划痕实验可明显看到低表达CXCR4的细胞迁移能力降低。本实验下调CXCR4表达时,阻断了CXCR4/SDF-1轴,细胞的增殖和迁移均受影响,说明了CXCR4 /SDF-1轴与乳腺癌细胞的转移和增殖密切相关。这对临床预测肿瘤转移的早期诊断有一定意义,并且可能成为临床治疗乳腺癌转移的新靶点。