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本研究检测了北京地区犬细小病毒(CPV)分离株的基因变异和进化情况。 根据已公布的CPV衣壳蛋白VP2的基因序列和CPV-2、CPV-2a与CPV-2b的氨基酸位点差异,建立区分CPV-2、CPV-2a与CPV-2b的聚合酶链反应(PCR),应用型特异性PCR将CPV-2与CPV-2a及CPV-2b区分开来,应用检测点突变的特殊等位基因PCR(PASA),将CPV-2a与CPV-2b区分开来。随后,用此方法对不同年代的CPV细胞培养物或粪便提取物进行分型。 研究了CPV VP2位点297(Ser变为Ala)的变异情况。根据VP2位点297的改变引起限制性内切酶AIu Ⅰ酶切位点的变化,建立PCR依赖性限制性片段长度多态性分析(PRFL)方法,检测VP2位点297的变异。 对CPV-010株(CPV-2a)与CPV-21株(CPV-2b)的VP2基因进行了克隆、测序,并与文献报道的其它CPV的VP2基因进行同源性比较及种系分析。同时对CPV-010株(CPV-2a)与CPV-21株(CPV-2b)的末端重复序列克隆、测序,并与文献报道的CPV-B、CPV-15、FPLV、MEV的末端重复序列比较。 通过对北京地区31株CPV的变异研究表明,目前CPV-2a与CPV-2b共同存在于犬群中。未检出CPV-2;检出18株CPV-2a(占58%),13株CPV-2b(占42%);CPV-2b最早检出时间是1997年,随年代增加,CPV-2b所占比例有逐年增多的趋势。VP2中位点297的检测显示:30株CPV-2a与CPV-2b的VP2位点297是Ala,表明目前流行的CPV-2a与CPV-2b的VP2位点297主要是Ala。通过对CPV-010株(CPV-2a)与CPV-21株(CPV-2b)的VP2基因克隆、测序,获得VP2基因全长1775bp,编码584个氨基酸。CPV-010、CPV-21的VP2基因和其它CPV的VP2基因核苷酸序列同源性达99.38%~99.66%,氨基酸序列同源性达98.63%~99.83%。CPV-010与CPV-21的末端重复序列克隆、测序显示:CPV-010与CPV-21的末端重复序列位置和个数均相同,同源性为99.33%。 通过对北京地区CPV分离株的变异研究发现,CPV进化和变异的趋势与国外基本一致。通过基因进化树的分析表明,国内外的CPV起源于共同的祖先。