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目的:1.探讨Notch信号通路对HaCaT细胞(人永生化角质形成细胞系)增殖和分化的影响;2.分析Notch信号通路在银屑病皮损区皮肤组织中的表达情况;3.评价龙胆泻肝汤加减对豚鼠银屑病样皮损Notchl、Jaggedl和Hes-1表达的影响。方法:1.以角质形成细胞HaCaT细胞为研究对象,分别采用MTT法、流式细胞技术、Western blot技术检测Notch信号通路激活剂(Jaggedl-Fc融合蛋白)和Notch信号通路抑制剂(DAPT)对HaCaT细胞增殖、凋亡和分化的影响。2.采用实时荧光定量RT-PCR技术和Western blot技术检测银屑病患者皮损区皮肤组织Notchl、Jaggedl和Hes-lmRNA和蛋白的表达情况。3.选取80只豚鼠,用5%普萘洛尔乳剂外涂豚鼠耳背制备银屑病样病理改变模型,设置空白组、模型组、西药对照组、成药对照组及龙胆泻肝汤加减低、中、高剂量治疗组,行普通病理切片HE染色检测皮损病理改变Baker评分及炎症细胞浸润情况;免疫组化技术检测皮损组织Notchl、Jaggedl和Hes-1在细胞中的表达情况。结果:1.MTT结果显示,与对照组相比,Jaggedl-Fc融合蛋白处理组的吸光度值明显增高(P<0.05),表明Jaggedl-Fc融合蛋白能够明显促进HaCaT细胞增殖。流式细胞术结果显示,Jaggedl-Fc融合蛋白处理组的细胞凋亡率为4.76±1.13,显著低于对照组(13.69±2.05)(P<0.01),DAPT处理组的细胞凋亡率为26.87±3.18,与对照组相比差异显著(P<0.01)。说明激活Notch信号通路能够抑制HaCaT细胞凋亡,阻断Notch信号通路能够促进HaCaT细胞凋亡。Western blot结果显示:.Jaggedl-Fc融合蛋白能够明显促进Bcl-2蛋白表达(P<0.01),抑制Bax蛋白表达(P<0.01);DAPT则能够明显抑制Bcl-2蛋白表达(P<0.01),促进Bax蛋白表达(P<0.01)。Jaggedl-Fc融合蛋白能够明显抑制Keratinl和Involucrin蛋白表达(P<0.05),DAPT则能够明显促进Keratinl和Involucrin蛋白表达(P<0.05)。2.患病组皮损处Notchl、Jaggedl和Hes-1 mRNA和蛋白的表达水平显著高于对照组和正常组,差异具有统计学意义(P<0.01),对照组与正常组相比Notchl、Jaggedl和Hes-1 mRNA和蛋白的表达水平无显著性差异(P>0.05)。提示Notch信号通路的激活与银屑病的发生密切相关。3.模型组和其余各组相比,Baker评分和炎症细胞浸润数评分均有显著性差异(P<0.01),提示模型制备成功。西药对照组Barker评分和细胞浸润情况低于成药对照组(P＜0.05),西药对照组与中剂量组两者评分接近(P＞0.05),成药组与低、高剂量组情况接近(P>0.05)。中剂量组与西药对照组镜下均可见角化不全、过度现象减轻,表皮突变平,棘层变薄等征象。免疫组化染色结果发现,模型组的Notchl、jaggedl和Hes-1的表达水平显著高于其他各组。龙胆泻肝汤加减中剂量组与西药对照组三种蛋白的表达量相当,且显著高于龙胆泻肝汤加减高、低剂量组与成药对照组。结论:1.Notch信号通路参与了 HaCaT细胞的增殖和分化,激活Notch信号通路能够促进HaCaT细胞的增殖、抑制HaCaT细胞的凋亡和分化。反之,阻断Notch信号通路能够抑制HaCaT细胞的增殖、促进HaCaT细胞的凋亡和分化。2.Notch信号通路参与HaCaT细胞的凋亡可能与调控Bcl-2和Bax蛋白的表达有关,Notch信号通路参与HaCaT细胞的分化可能与调控Keratinl和Involucrin蛋白表达有关。3.Notch信号通路关键因子在银屑病患者皮损区皮肤组织中表达上调,Notch信号通路的激活与银屑病的发生密切相关。4.中剂量龙胆泻肝汤加减(4.5g/kg)对银屑病的治疗效果较好,其可能是通过调控Notchl、Jaggedl和Hes-1的表达量抑制微血管生成达到治疗银屑病的目的。