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目的：观察LIPUS介导威灵仙对体外培养的兔膝关节软骨细胞增殖、Ⅱ型胶原分泌及TGF-β1表达的协同作用,并探讨LIPUS介导威灵仙在软骨损伤修复中的作用及机制。方法：无菌操作下打开新西兰白兔膝关节,刮取关节软骨并剪碎,用0.2%Ⅱ型胶原酶消化、分离、培养原代软骨细胞,通过倒置显微镜逐日观察原代软骨细胞生长、形态变化,并用甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫细胞化学方法鉴定培养结果及细胞活性；取第2代处于对数生长期软骨细胞随机分为四组,分别加入完全培养基及0.01、0.1、0.5mg/ml的威灵仙培养基,CCK-8比色法检测不同浓度威灵仙对软骨细胞增殖的影响,并筛选出最有利于软骨细胞生长的威灵仙浓度；取第2代处于对数生长期软骨细胞随机分为对照组和三个实验组共四组,对照组仅用完全培养基培养,实验组分别予超声强度为40mv、50mv、80mv的lipus干预,CCK-8比色法检测不同强度LIPUS对软骨细胞增殖的影响,并筛选出最有利于软骨细胞生长的最佳参数；取第2代处于对数生长期软骨细胞随机分为对照组和三个实验组共四组,A组(对照组)仅用完全培养基培养,B(威灵仙组)组加入筛选的最优威灵仙浓度培养基培养,C组(LIPUS组)用筛选的最佳超声强度干预,D组(威灵仙+LIPUS组)加入筛选的最优威灵仙浓度培养基培养,同时用筛选的最佳超声强度干预,CCK-8比色法检测LIPUS介导威灵仙对软骨细胞增殖的影响,免疫细胞化学方法检测LIPUS介导威灵仙对软骨细胞Ⅱ型胶原分泌的影响,Western Blot法检测LIPUS介导威灵仙对软骨细胞TGF-β1表达的影响。结果：(1)原代软骨细胞消化提取后接种,镜下见呈小圆形,形态规则,接种后2h即有少量软骨细胞贴壁,24h后多数细胞贴壁,呈多角形或不规则状；培养3-4天,细胞数量明显增多,细胞可铺满瓶底75%左右,呈现出“铺路石”样外观。传代后24h细胞贴壁率明显高于原代细胞,分布相对均匀,3天后细胞融合成片可再次进行传代培养；前3代的软骨细胞增殖速度快,至第4代之后,软骨细胞,细胞增殖速度明显放缓,且外观呈长梭形,到第5代之后尤为明显。甲苯胺蓝染色后细胞外基质呈蓝色,细胞核呈深蓝色,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色可见胞浆内有棕黄色颗粒。(2)不同浓度威灵仙均能促进软骨细胞增殖,其中0.1mg/ml威灵仙促进软骨细胞增殖的效果最明显。(3)不同强度LIPUS均能促进软骨细胞增殖,中强度为50mv的LIPUS促进软骨细胞增殖的效果最明显。(4)威灵仙联合LPIUS后促进软骨细胞增殖、Ⅱ型胶原分泌及TGF-β1表达,且优于其他组。结论：LIPUS介导威灵仙在促进软骨细胞增殖、Ⅱ型胶原分泌及TGF-β1表达过程中具有协同作用,能够有助于软骨细胞的修复,为关节软骨损伤的修复提供新的方法。