【摘 要】
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脑是体内氧代谢率最高的器官,在正常的生理状态下产生大量的DNA损伤.损伤的DNA可以引起基因突变和细胞周期停滞,最后导致肿瘤的发生和细胞凋亡.因此及时高效的DNA修复系统在
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脑是体内氧代谢率最高的器官,在正常的生理状态下产生大量的DNA损伤.损伤的DNA可以引起基因突变和细胞周期停滞,最后导致肿瘤的发生和细胞凋亡.因此及时高效的DNA修复系统在维持基因组的稳定性和细胞的正常生理功能中起了关键的作用.ERCC1作为一种重要的核苷酸剪切修复因子参与了多种损伤DNA的修复过程.为了进一步了解ERCC1蛋白的功能,实验首先克隆了人的ERCC1基因,经测序分析后与公开发表的序列基因一致.随后构建了原核表达质粒pGEX-4T-1-ERCC1和真核表达质粒pEGFP-N1-ERCC1,并分别在大肠杆菌BL21和PC12细胞上实现了外源性ERCC1基因的表达.其后在脑缺血后的大鼠侧脑室内微量注射pEGFP-N1-ERCC1质粒,在缺血再灌3天后观察到EGFP-ERCC1融合蛋白在大鼠脑同的高表达.小结:该实验成功克隆了人类的ERCC1基因,构建了真核表达载体,并在大鼠脑内有效地表达了外源性ERCC1蛋白.实验发现ERCC1表达下降与衰老密切相关,同时脑缺血再灌后内源性的ERCC1表达也降低.但是脑内ERCC1高表达的意义还有待于进一步的研究.
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