利用基因组原位杂交和核rDNA ITS序列研究阿拉善鹅观草染色体组组成

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禾本科小麦族许多物种具有耐寒、耐旱和抗病虫能力,因此,可以用于培育优良的牧草品种,也可以用来改良麦类作物,是麦类作物和牧草遗传改良可开发的重要基因库。小麦族物种主要包含有Ns、H、P、St、Y、W、E等20多个基本染色体组。在小麦族这个丰富的基因资源库中,一些物种的染色体组组成仍然未知,对人们有效利用小麦族基因资源造成了很大的阻碍。因此,鉴定物种的染色体组组成是小麦族物种分类、亲缘关系研究和确有效利用基因资源的一个重要而基础的前提。鹅观草属(Roegneria C.Koch)是小麦族中的一个大属,全世界约有130余种,其中许多物种均是重要的牧草资源。鹅观草属所有物种根据芒的长短分为有芒和无芒两大类群。无芒类群当中,阿拉善鹅观草、大丛鹅观草、昌都鹅观草均为我国特有的鹅观草属物种。卢宝荣和张海琴等利用染色体组分析法鉴定了昌都鹅观草的染色体组组成为StSt;大鹅观草的染色体组组成为StY;阿拉善鹅观草和大丛鹅观草含有一组St染色体组,另一染色体组成尚未确定。本研究通过基因组原位杂交(GISH)和核rDNAITS序列对阿拉善鹅观草(Roegneria alashanica Keng)进行分析,旨在:(1)确认阿拉善鹅观草的染色体组组成;(2)阿拉善鹅观草与其它鹅观草属物种和拟鹅观草属近缘属种的亲缘关系。以期为阿拉善鹅观草的系统地位和分类处理提供基础理论资料。主要研究结果如下:(1)分别以Roegneria elytrigioides(2n=4x=28, St1St2)、Pseudoroegneria geniculata (2n=4x=28,StSt), Roegneria ciliaris (2n=4x=28, StY)、Roegneria grandis (2n=4x=28, StY)基因组DNA为探针,Pseudoroegneria strigosa ssp.aegilopoides(2n=2x=14,St)基因组DNA为封阻,对Roegneria alashanica进行GISH分析,结果显示:1)以R.elytrigioides和Pse. geniculata作探针时,14条染色体有明显的荧光信号;2)以R. ciliaris作探针时,染色体没有出现杂交信号;3)当以R. grandis作探针时,10-14条染色体局部有荧光信号,以上实验结说明:阿拉善鹅观草含有一组St染色体组,另一染色体组与St染色体组有亲缘关系,与Y染色体组亲缘关系较远。(2)以Pseudoroegneria libanotica作探针,Hordeum bogdanii(2n=2x=14,H), Agropyron cristatum(2n=2x=14,P),Lophopyrum elongatum(2n=2x=14,Ee)分别作封阻,对R. alashanica进行GISH分析,结果显示:1)当H. bogdanii作封阻时,28条染色体均有黄绿色信号;2)Lo. elongatum作封阻时,14-16条染色体部分有信号;3)当以Ag. cristatum作封阻时,21条染色体有荧光信号。以上结果表明阿拉善鹅观草含有一组St染色体组,另一组与E和P染色体组存在一定亲缘关系,与H染色体组亲缘关系较远。(3)利用Lophopyrum elongatum,Agropyron cristatum,Hordeum bogdanii基因组DNA分别作探针,Pseudoroegneria libanotica作封阻,对R. alashanica进行GISH分析,结果显示:1)当用Lo. elongatum作探针,Pse. libanotica作封阻时,有12-14条染色体出现黄绿色荧光信号;2)当Ag. cristatum作探针时,7-10条染色体出现黄绿色荧光信号;3)H. bogdanii作探针时,28条染色体都未出现荧光信号。结果表明:阿拉善鹅观草其中一个染色体组与Ee和P染色体组有同源性,与H染色体组没有同源性。(4)对包括阿拉善鹅观草在内的11份Roegneria材料(StY或StSt)、9份Pseudoroegneria材料(St或StSt)、2份Lophopyrum材料(Ee或Eb)、2份Elytrigia材料(EeSt或EbEeSt)、4份Elymus材料(StH)、2份Douglasdeweya材料(StP)、2份Hordeum材料(H)、1份Agropyron材料(P)、2份Psathyrostachys材料(Ns)和2份Australopyrum材料(W)等共38个材料用于ITS序列分析和系统发育研究。在NJ系统进化树中,共有四大分支,包括St支、W/P支、H支和Ns支,其中St分支最大,包含了拟鹅观草属、鹅观草属、披碱草属等物种。阿拉善鹅观草的所有克隆分为了两支,其中一部分克隆聚在了St支,另一部分与W/P染色体组聚为了一支,W/P支和St支聚为一大支。表明:阿拉善鹅观草有一组St染色体组,另一染色体组与St染色体组、P染色体组等有一定亲缘关系,与H和Ns染色体组亲缘关系较远。因此,阿拉善鹅观草含有一组St染色体组,另一组染色体组与St、E、P等染色体组有一定亲缘关系,与Y和H染色体组亲缘关系较远。
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