甲壳素脱乙酰酶的活力优化研究

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浆料既关系到生产的质量和效率,又关系到消费及后处理的环保性和生态性,经纱上浆过程中的浆料对环境造成污染的途径主要有两种:一是浆料调制和使用过程中剩浆和未经处理的含浆废水的排放造成污染;二是织造完毕后,织物退浆时清洗下来的退浆废水未经处理就排放而造成污染:另外退浆煮练后残留在坯布上的某些浆料成分,也不利于人体健康。所以对于织造企业而言,浆纱工序使用绿色环保浆料,对纺织行业的可持续发展和环境保护具有重要的意义。甲壳素及其衍生物被公认为是绿色高分子材料,目前可用于上浆的甲壳素浆料多为壳聚糖类。其浆料成膜性良好、耐磨性能好,对特种纤维也有着良好的粘附性和亲和力。而且它还具有良好的生物降解性和生物活性、优良的抗菌和抑菌作用,这种天然生物高分子聚合物完全符合环保要求,其优良的性能使其有待于被开发为新一代绿色浆料。但甲壳素的稳定化学结构限制了它的溶解能力,目前,壳聚糖的制备大多采用化学方法,用这种方法得到的壳聚糖的分子量分布宽、均一性差,并且浪费能源,对环境污染严重。而酶降解法不发生副反应,反应条件温和,工艺较易控制,是一种较为理想的降解方法,因此,研究用生物酶改善甲壳素的水溶性对改进甲壳素浆料的实用性具有重要意义,并且符合绿色浆料的发展趋势。   本课题研究用专一性酶即甲壳素脱乙酰酶降解法制备壳聚糖,并且在前人研究的基础上,优化前人通过研究选择的酶,进一步提高酶的活力以及甲壳素的脱乙酰度。先对产甲壳素脱乙酰酶的菌种即构巢曲霉进行斜面培养,观察其菌落形态,然后通过摇瓶液体发酵培养,最后离心提取其上清液得到甲壳素脱乙酰酶。为了提高甲壳素脱乙酰酶的活力,研究各培养条件如培养时间,温度、pH值、碳源(可溶性壳聚糖)浓度、氮源(酵母粉)浓度、金属离子(Co2+)浓度和接种量对酶活的影响。通过单因子试验和正交设计试验,得出了发酵液体培养的最佳条件:当培养时间96h、初始pH值为6.5、发酵温度31℃、碳源浓度2%、氮源浓度2%、金属离子浓度0.01mol/L、接种量6%,所产甲壳素脱乙酰酶的酶活达到13.68U/mL。   本课题还研究了甲壳素脱乙酰酶作用于经过预处理的甲壳素后的脱乙酰效果。将液体发酵培养后的粗酶液离心取其上清液,将其作用于有一定脱乙酰度的甲壳素,研究工艺参数pH值、温度、时间等对脱乙酰效果的影响,以脱乙酰度为测试指标,采用正交设计试验,找出最优工艺条件,生产制备出了脱乙酰度为67.78%的壳聚糖产品。
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