【摘 要】
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第一部分重组腺病毒Ad5-BMP9的构建目的:构建表达目的基因BMP9的重组腺病毒质粒Ad5-BMP9,转染包装细胞HEK293后收获高滴度的腺病毒感染液。方法:通过同源重组的方法构建表达
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第一部分重组腺病毒Ad5-BMP9的构建目的:构建表达目的基因BMP9的重组腺病毒质粒Ad5-BMP9,转染包装细胞HEK293后收获高滴度的腺病毒感染液。方法:通过同源重组的方法构建表达目的基因BMP9的腺病毒质粒,首先通过PCR的方法扩增含有接头的目的基因片断BMP9,定向克隆进入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,再转导入含有腺病毒骨架质粒Adeasy -1的感受态细菌BJ-Adeasy,在细菌内同源重组产生腺病毒质粒Ad5-BMP9,最后通过脂质体介导入包装细胞HEK293,经过乒乓交互感染收获高滴度病毒感染液。结果:成功构建腺病毒重组质粒Ad5-BMP9,收获的病毒感染液滴度达1.5×1011pfu/ml。结论:细菌内的同源重组是一种高效率的构建腺病毒质粒的方法,成功的构建重组腺病毒质粒Ad5-BMP9,为下一步研究打下了良好的基础。
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