肿瘤一直以来都是困扰人类的一个健康难题。随着其发生机制的明了以及分子生物学技术的发展，肿瘤的早期诊断和个体化治疗已经成为肿瘤预防和治疗的一个趋势。而无论是对肿瘤进行早期诊断还是实行个体化治疗都依赖肿瘤本身的特异性的生物标记物。这些生物标记物主要有基因突变、基因表达水平的异常和表观遗传学的异常等。对这些生物标记物进行检测和分析，就能够得到相关的分子生物学信息，从而依据这些信息来实现对肿瘤的早期诊断和个体化治疗。本论文以实时PCR为技术平台，建立了相应的检测体系对实体瘤中的基因表达水平进行了定量检测，从而服务于肿瘤的早期诊断和个体化治疗。　　 第一章：绪论　　 本章介绍了结直肠癌早期诊断以及乳腺癌治疗中的生物标记物，此外着重讲述了实时PCR技术的原理和应用，最后提出了本论文的研究目的、内容和意义。　　 第二章：多重qRT-PCR定量检测乳腺癌中HER2表达水平　　 乳腺癌对女性的健康造成了极大的威胁，在治疗过程中曲妥珠单抗可以起到明显的效果，但是它只对HER2表达过量的患者有效。因此通过对HER2表达水平进行定量检测筛选药物适合人群，在乳腺癌的个体化治疗中至关重要。本研究以MIQE(The Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCRExperiments; MIQE)为定量指南，筛选出了ACTB、GAPD、YWHAZ和HPRT1共四个在乳腺癌中表达最稳定的管家基因作为检测体系中的参照基因，并通过引入HAND（Homo-Tag Assisted Non-Dimer; HAND）系统建立了一管具有高灵敏度的五重实时PCR体系，实现了对HER2表达水平的定量检测。本研究共检测了26份乳腺癌新鲜冷冻组织标本和122份石蜡包埋的乳腺癌组织标本，通过对比发现我们的检测结果与临床免疫组化结果的一致性指数κ值在0.6-0.7，因此说明两个方法的一致性很高。　　 第三章：改良多重实时荧光PCR定量检测DNA甲基化　　 结直肠癌是世界上最常见的慢性病之一，并且其死亡率超过半数以上。虽然在治疗方法上有很大的提高，但是结直肠癌患者存活率的提高却受到早期诊断以及有限的最佳治疗决策能力的限制。研究证实表观遗传学的改变在结直肠癌的发病和发展中起着重要的作用，这些表观遗传学标记包括DNA甲基化，miRNA表达和组蛋白修饰。本研究通过改良实时PCR技术对结直肠癌患者中的SEPT9和ALX4基因的甲基化水平进行定量检测。最终建立了一个多重实时PCR体系，其目的基因检测的灵敏度全部为20 pg。我们一共检测了50份结直肠癌癌组织标本和50份相对应的癌旁组织标本，在癌旁组织标本中SEPT9和ALX4均为甲基化阴性，在癌组织标本中SEPT9和ALX4阳性检出率分别为30％(15/50)和12％(6/50)。通过MethyLight方法检测最终阳性率分别为26％(13/50)和12％(6/50)。两种方法检测结果具有相当高的一致性，说明我们的检测体系具有较高的可靠性。