拟南芥SUMO E3连接酶AtMMS21与染色质重塑因子AtBRM互作调控根生长发育的机制研究

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翻译后修饰参与调控蛋白质的定位、活性和稳定性等,从而影响细胞内的各个生理生化过程。SUMO化修饰是一种重要的蛋白质翻译后修饰,参与植物生长发育和胁迫应答的多条信号途径。本课题组已发现拟南芥SUMO E3连接酶参与植物分生组织发育的调节、DNA损伤修复以及细胞周期等过程,表明其对染色质的调控及基因组的稳定性有重要作用。本论文主要通过生物化学、遗传学和生理学等方法,探讨AtMMS21与染色质重塑因子AtBRM互作且如何调控根的发育。主要取得了以下结果:  1.酵母双杂交筛选发现AtMMS21与染色质重塑因子AtBRM互作,进一步鉴定其相互作用结构域,发现AtBRM N端与AtMMS21 N端发生相互作用;体外pull down实验进一步验证了这两个蛋白之间存在直接的物理作用;荧光素酶双分子互补实验进一步验证了两者在体内存在相互作用。  2.AtMMS21与AtBRM的功能缺失突变体均呈现出短根的表型,且基因表达分析发现,mms21-1与brm-3突变体根中PLT1/2的表达量都出现了不同程度的下降,这表明AtMMS21与AtBRM可能在同一信号通路上影响根尖分生组织的维持。过表达AtBRM可以部分恢复mms21-1短根的表型,进一步表明AtMMS21介导了AtBRM蛋白的调控根的发育。  3.观察ProBRM:BRM-GFP和ProBRM:BRM-GFP/mms21-1的根尖GFP荧光强度,发现mms21-1中GFP的荧光明显弱于WT中GFP的荧光强度;Western杂交结果表明ProBRM:BRM-G FP/mms21-1中BRM-GFP的蛋白表达量也是明显低于野生型ProBRM:BRM-GFP中BRM-GFP的蛋白水平,结果表明AtMMS21可能参与AtBRM蛋白稳定性的调节。  综上所述,本研究首次发现AtMMS21与AtBRM相互作用,参与AtBRM蛋白的稳定性调节;AtMMS21与AtBRM在体内协同作用,共同通过PLT1/2途径来调控根的生长发育。  
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