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目的(1)建立优化的Qu ECh ERS(快速、简便、廉价、有效、坚固且安全)法为样品前处理方法,结合超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱法(UHPLC-HESI-Q-Orbitrap-MS)对牛奶样品中25种大环内酯类原药残留进行检测,同时对25种目标物进行质谱裂解规律研究,以期能够快速、准确的对市场上的牛奶样品中药物痕量残留进行筛查。(2)建立了以冷冻离心法对牛奶样品进行前处理,同时联合超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱法对牛奶中可能残留的6种大环内酯类代谢物进行快速检测的的分析方法。(3)建立了冷冻离心法为样品前处理方法,同时结合液相色谱串联质谱法测定牛奶样品中31种大环内酯类化合物的的分析方法,以确保能对31种大环内酯化合物进行痕量检测以及准确定量,进一步保障食品安全。方法(1)本实验移取10m L的0.1%(v/v)甲酸乙腈溶液加入到空白牛奶中,提取25种大环内酯类目标物。加入氯化钠以便于牛奶中蛋白质沉淀,加入无水硫酸镁进行脱水及分层,添加N-丙基乙二胺(PSA)、C18和乙酸钠等吸附剂材料对样品进行净化,然后进行低温离心,静置后进行氮吹,再用1m L甲醇进行复溶,用0.22μm尼龙膜进行过滤,通过XBridge-C18柱进行色谱分离,电喷雾正负离子同时监测,全扫描(full-ms)和二级质谱扫描(dd-ms~2)模式进行扫描,基质匹配的方法用于定量。(2)牛奶中的6种大环内酯类抗生素代谢物用乙腈溶液提取,加入氯化钠和无水硫酸镁分别使牛奶样品中蛋白质沉淀、脱水以及分层,分别采用Qu ECh ERS、SPE固相萃取法及冷冻离心法对牛奶样品进行提取、净化,然后氮气流下吹至试管干燥,继而用1m L甲醇进行复溶,最后过0.22μm尼龙膜过滤。通过色谱柱XBridge-C18柱进行分离,电喷雾正负离子模式同时进行监测,一级全扫描(full-ms)和二级质谱扫描(dd-ms~2)模式进行扫描,基质匹配的方法对目标物进行定量。(3)对于牛奶中的31种大环内酯类化合物,本实验选取0.1%(v/v)甲酸乙腈溶液进行提取,加入氯化钠和无水硫酸镁等无机盐进行样品中的杂质进行沉淀及净化,之后于40℃下氮吹浓缩,待试管底部干燥后用1m L甲醇复溶,过0.22μm尼龙膜过滤,选取XBridge-C18色谱柱进行分离,多反应模式(MRM)进行监测,基质匹配法定量。结果(1)本实验建立的超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱法测定牛奶中25种大环内酯类原药的方法,在1～200μg/L的浓度范围内呈现良好的线性关系,线性相关系数r均大于0.99。取6次平行实验的回收率的平均值为平均回收率,结果所得25种目标物的平均回收率均于80.2%～119.1%。在同一日内检测所得的日内精密度在1.2%～14.8%,间隔一日检测后的日间精密度在1.1%～12.9%,方法的检出限和定量限分别处于0.1～0.5μg/kg和0.3～2.3μg/kg。(2)采用冷冻离心法对牛奶样品进行预处理,结合超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱法测定牛奶中6种大环内酯类抗生素代谢物的方法在1～200μg/L浓度范围内有着良好的线性关系,r大于0.99。对比三种前处理方法后,仅冷冻离心法下6种目标化合物的平均回收率可达84.4%～86.1%,因此被选为此部分前处理方法。该方法的日内精密度为1.9%～5.7%,日间精密度为1.1%～9.9%;方法的检出限为0.1～0.2μg/kg,方法定量限为0.3～0.7μg/kg。(3)使用液相色谱串联质谱法测定牛奶中6种大环内酯类抗生素代谢物及25种大环内酯类抗生素原药,线性关系在1～200μg/L浓度范围内表现良好(r>0.99),31种目标化合物的平均回收率均可达75.6%～117.6%,该方法的日内精密度处于1.2%～9.5%,日间精密度在1.1%～9.2%;方法的检出限为0.1～0.5μg/kg,方法定量限于0.3～2.2μg/kg。结论(1)本实验采用优化的Qu ECh ERS法对样品进行前处理,同时结合超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱法,对牛奶样品中25种常见大环内酯类抗生素原药进行了正、负离子同时监测,采用响应面法(RSM)法优化了最佳的样品净化条件。对于这些大环内酯类化合物,优化后的Qu ECh ERS法进行样品前处理后25种目标物的平均回收率均大于70%。该方法周期短、分辨率高、稳定性好、准确度高,适用于市场上牛奶样品的高通量筛查及检测。(2)基质干扰以及本实验研究了三种不同的前处理方法对牛奶样品中6种大环内酯类抗生素代谢物净化程度、回收率的影响,采用超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱法对牛奶中的6种代谢物进行检测和分析,并对市场中的多个样品进行筛查。可检测到痕量的大环内酯抗生素残留,验证了方法的实用性。(3)本实验应用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)对牛奶中6种代谢物及25种常见大环内酯类原药的残留进行检测分析,采用冷冻离心的样品前处理方法对牛奶样品进行提取和分离,进一步对目标物进行准确定性和定量。对于这31种大环内酯类抗生素及代谢物,在该方法下的平均回收率均大于75.6%。结果可得,该方法的检测灵敏度和准确度较高,适用于牛奶中的大环内酯类抗生素及代谢物的残留检测,且已成功应用于市场中牛奶样品的筛查。