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金钱鱼不但是一种具有观赏和食用价值的名贵海水经济鱼类,而且雌性生长速度明显高于雄性。因此,获得雌雄性别差异分子标记,从遗传角度鉴定金钱鱼的性别,对实现分子辅助育种及后续的单性化养殖意义重大。目前,随着环境恶化,金钱鱼种质资源退化越来越严重,因此,对金钱鱼遗传多样性进行评估,可为制定科学的资源保护提供理论参考。本文以金钱鱼为研究对象,采用SSR、AFLP、SRAP三种分子标记技术筛选其雌雄性别差异标记,并分析雌、雄群体遗传多样性。主要结果如下:1、基于SSR技术的金钱鱼性别特异分子标记筛选及雌雄群体遗传多样性分析以金钱鱼基因组为模板,通过磁珠富集法得到65条微卫星序列,并设计了45对引物对金钱鱼雌雄基因池进行初步筛选。结果发现,2对引物(SAS21、SAS23)可扩增出雌雄差异条带。分别以雌雄金钱鱼各30尾DNA为模板,再次采用引物SAS21、SAS23进行扩增。引物SAS21扩增的差异条带在雌性金钱鱼中出现比率为30%,在雄性金钱鱼中所占比率为10%;而引物SAS23扩增的差异条带在雌性金钱鱼中所占比率为10%,在雄性金钱鱼中出现比率为60%。以筛选获得多态性较高的3对微卫星引物对金钱鱼雌雄群体进行遗传多样性分析,结果表明,金钱鱼雌雄群体Nei’基因多样性指数(H)分别为0.5342和0.5408,Shannon’s信息指数(I)分别0.962和0.996;多态信息含量(PIC)分别为0.4708和0.4853;有效等位基因(Ne)分别为1.2034和1.252。2、基于AFLP技术的金钱鱼性别特异分子标记筛选及雌雄群体遗传多样性分析利用144对AFLP引物组合对雌、雄金钱鱼基因池进行初步筛选,得到5760个条带,其中3对引物(E7M8、E1M3、E2M8)可扩增出雌雄差异条带。以雌、雄金钱鱼各30尾DNA为模板,再次用引物E7M8、E1M3、E2M8进行扩增,其中引物E7M8扩增的差异条带在雌性个体中所占比率为83.3%,在雄性个体中所占比例为40%;引物E1M3扩增的差异条带在雌性个体中所占比率为100%,在雄性个体中所占比率为44%;引物E2M8扩增的差异条带在雌性个体中所占比率41.1%,在雄性个体中所占比率为0%。利用筛选所得多态性较好的6对引物对金钱鱼雌、雄群体进行遗传多样性分析,结果发现雌性个体检测到51个多态位点,多态位点比例为29.48%,雄性个体检测到68个多态位点,多态位点比例较高,达到39.31%。金钱鱼雌雄群体的H分别为0.1149和0.1465;I分别为0.1682和0.2169;Ne分别为1.2034和1.252;此外金钱鱼雌、雄个体间的相似系数为0.8927-0.8986,遗传距离为0.1069-0.1135,表明金钱鱼雌雄间分化不大。3、基于SRAP技术的金钱鱼性别特异分子标记筛选及雌雄群体遗传多样性分析利用64对SRAP引物组合对金钱鱼雌、雄基因池DNA进行初步筛选,共得到461个扩增条带,并不具有雌雄特异条带。此外,引物Me4Em5扩增出的差异条带在30尾雌性金钱鱼中所占比率为96.7%,在雄性金钱鱼中所占比率为30%。筛选所得多态性较好的3对SRAP引物组合对金钱鱼雌雄群体遗传多样性进行分析,结果发现金钱鱼雌性群体和雄性群体的H分别为0.3585和0.3984;Shannon指数分别为0.5269和0.5757;PIC分别为0.28482和0.30935;Ne分别为1.616和1.703。金钱鱼雌性群体和雄性群体间的遗传距离和遗传相似性分别为0.1329和0.8756。利用SSR、AFLP、SRAP三种分子标记对金钱鱼雌雄差异条带进行筛选,未找到性别特异标记,但采用SSR技术,以引物SAS23扩增,出现差异条带的个体85.7%的可能为雄性;采用AFLP技术,以引物E2M8扩增,出现差异条带的个体100%的可能为雌性。用同样三种分子标记分析金钱鱼雌、雄群体的遗传多样性,结果表明三种分子标记SSR、AFLP、SRAP技术所得结果具有一致性,即金钱鱼群体遗传多样性较低,雌雄间遗传变异小,而雄性金钱鱼遗传多样性高于雌性,良种选育的潜力较小。