【摘 要】
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背景:下腰痛（Low back pain,LBP）是一种普遍性疾病,约84%的人在其一生中的某个阶段会经历LBP的情况。多项研究表明由炎症反应和氧化压力介导的椎间盘退变（Intervertebral disc degeneration,IDD）可能是引起LBP的主要原因之一。当前对IDD性疾病的治疗主要是缓解临床症状,并未从根本上延缓IDD的进程。因此,探索治疗IDD的药物是很有必要的。目的:据报
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背景:下腰痛（Low back pain,LBP）是一种普遍性疾病,约84%的人在其一生中的某个阶段会经历LBP的情况。多项研究表明由炎症反应和氧化压力介导的椎间盘退变（Intervertebral disc degeneration,IDD）可能是引起LBP的主要原因之一。当前对IDD性疾病的治疗主要是缓解临床症状,并未从根本上延缓IDD的进程。因此,探索治疗IDD的药物是很有必要的。目的:据报道原花青素具有明显的抗炎和抗氧化作用,然而对IDD是否也具有保护作用目前仍不清楚。本研究旨在探索葡萄籽原花青素（Grape seed proanthocyanidins,GSP）对白介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）诱导IDD的保护作用,并进一步研究GSP抗凋亡、抗炎的作用机制。以期为临床开发延缓IDD进程的药物提供新的视野。方法:采用II型胶原酶和胰酶消化法获取SD大鼠尾椎原代髓核（Nucleus pulposus,NP）细胞。使用IL-1β刺激大鼠NP细胞建立体外IDD模型。采用细胞计数法（Cell counting kit 8,CCK-8）和普通光学显微镜法检测不同浓度的GSP对NP细胞活性、形态和数目的影响,选取合适的浓度进行后续实验。采用Western blotting、Hoechst 33258染色和细胞免疫荧光等方法测定GSP对IL-1β诱导的IDD的保护作用及作用机制。使用EX527抑制SIRT1的表达,再次运用Western blotting技术检测GSP对NF-κB信号通路及细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）代谢的影响。结果:成功提取大鼠尾椎原代NP细胞并传代培养,并且经过番红O固绿染色和甲苯胺蓝染色证实为NP细胞。在IL-1β诱导的NP细胞退变模型中,通过CCK-8检测法和普通光学显微镜分析发现GSP浓度在2.5μM至10μM时,NP细胞的活性逐渐增加,数目增多;通过Western blotting、细胞免疫荧光和Hoechst33258染色实验发现GSP以浓度依赖性的方式抑制IL-1β诱导NP细胞中炎症因子（i NOs、COX-2）,促凋亡蛋白（Bax、caspase-3）和基质降解酶（MMP13、ADAMTS4）的表达,而促进抗凋亡蛋白（Bcl-2）,II型胶原,SIRT1蛋白的表达;另外,GSP也可抑制IL-1β诱导的NF-κB信号通路的活化;当用EX527特异性抑制SIRT1的表达之后,发现GSP对ECM的保护作用和对NF-κB通路的抑制作用明显减弱。结论:本研究证实,在IL-1β刺激NP细胞建立体外IDD模型中,GSP可以通过调节SIRT1/NF-κB信号通路减轻NP细胞炎症反应、凋亡和ECM的分解代谢。因此,GSP可能是治疗IDD的潜在药物。
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