肝癌人源异种移植模型的优化及评价

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背景及目的:肝癌是严重危害人类健康的消化道恶性肿瘤之一。人源肿瘤异种移植(patient-derived tumor xenograft,PDX)模型能在一定程度克服肿瘤细胞系模型的缺陷。然而,目前PDX模型成瘤率低、成瘤时间长导致该模型的应用受限,因此,本研究目的是探索影响肝癌PDX模型建立的相关因素,建立成瘤率高及成瘤时间短的肝癌PDX模型。为肝癌患者提供有效的个体化治疗方案。方法:本研究共纳入20例肝癌患者。其中有10例接受了手术,10例接受了肝穿刺活检术。(1)将这些患者的新鲜肿瘤组织种植于NOD/SCID小鼠体内,观察模型的成瘤率、肿瘤生长、小鼠状态等情况,分析肿瘤组织的取材方式、种植部位、组织类型、组织分化程度、组织离体时间、患者年龄、性别、血细胞指标、是否化疗、肿瘤分化程度及增值指数Ki67、凝血指标、肝功能指标、肿瘤标记物对模型构建的影响。(2)使用核磁共振成像(MRI)观察肿瘤的血供及生长状态、判断肿瘤浸润和转移情况。(3)待肿瘤组织增大至300-500mm~3时将小鼠通过颈椎脱臼处死,取出移植瘤(P1),进行传代种植(P2,P3,P4)通过病理HE染色、免疫组织化学染色法及全外显子组测序比较PDX模型肿瘤组织与患者肿瘤组织在形态、分子及基因表达的相似性。结果:通过将16例患者的肿瘤组织种植于NOD/SCID小鼠中,9例患者肿瘤组织成瘤,患者肿瘤组织成瘤率为56%,所有患者肿瘤组织共建小鼠模型49只,成功16只,总成瘤率33%。将患者临床资料进行了统计分析,发现年龄、Ki67、淋巴细胞数有统计学意义,年龄小于55岁的患者其组织成瘤率高,Ki67≥50%的患者组织成瘤率高,淋巴细胞数小于1.2×10~9/L的患者组织成瘤率较高。选择肾包膜、腹股沟、大网膜、肝原位4个部位种植,只有肾包膜和腹股沟成瘤。肾包膜成瘤时间平均为33天,腹股沟成瘤时间平均为49天,肾包膜成瘤率为30%。腹股沟成瘤率为6%。大网膜及肝原位无成瘤。在2小时(成瘤率为88%)内种植成瘤率较高。核磁下观察PDX肿瘤生长情况,在移植9天后肿瘤组织体积逐渐增大,在15天左右肿瘤组织生长最快,在30天左右肿瘤组织生长停止。通过HE染色、免疫组化分析及全外显子测序,PDX模型保持了肿瘤细胞的分化,形态和结构特征,基因突变、肿瘤突变负荷、微卫星不稳定、错配修复缺陷、PDL-1表达与人体肿瘤具有较高相似性,可用于临床个体化治疗的研究。结论:年龄小于55岁、Ki67大于等于50%、淋巴细胞数小于1.2×10~9/L是影响成瘤率的患者因素。肾包膜下移植、组织在离体后2小时移植、中低分化肿瘤组织是影响PDX模型成功的关键因素。核磁是动态无创检测肝癌PDX模型的有效方法。该模型在传代中具有较好的保真性。
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