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本文通过离体原代培养的小鼠脾脏B淋巴细胞和小鼠为实验对象,运用细胞培养、流式细胞分析、激光共聚焦显微镜分析等免疫学和细胞学技术,综合研究和观察了hsBLys在离体和在体条件下对B淋巴细胞的增殖、存活和分化的活性作用及其胞内Ca2+信号变化,从多个角度探讨了hsBLyS对免疫细胞特别是B淋巴细胞的发育分化乃至整体免疫系统的调控作用及其作用机制。结果如下: 1 hsBLyS对离体脾B淋巴细胞增殖及存活的影响 用带有抗CD19的磁珠分离脾脏的B淋巴细胞,调整细胞浓度至1×105个/ml,适应性培养4h后加入hsBLyS或/和anti-IgM的不同浓度的工作液,继续培养一定时间后MTT法检测光吸收值。结果表明:hsBLys单刺激能够诱导B淋巴细胞增殖,且hsBLyS在0.5-2μg/ml浓度范围内随着浓度升高而加强;hsBLyS+anti-IgM共刺激脾脏B细胞虽没有增殖,但进一步在LPS刺激后表现出增殖明显升高,其刺激指数极显著高于对照组:hsBLyS在体外可以延长B淋巴细胞的存活时间。提示:hsBLyS能够诱导体外培养的脾脏B淋巴细胞的存活和增殖,hsBLyS+anti-IgM共同作用能增强B淋巴细胞免疫活性。 2 hsBLyS单体及三聚体对离体脾B淋巴细胞作用比较 用带有抗CD19的磁珠分离脾脏的B淋巴细胞,调整细胞浓度至1×105个/ml,适应性培养4h后加入hsBLyS单体或三聚体以及anti-IgM的不同浓度的工作液,继续培养一定时间后MTT法检测光吸收值。结果表明:加入hsBLvS三聚体培养的B细胞的增殖活性高于或显著高于对照组,而加入hsBLvS单体的B细胞与对照组相比变化不明显。提示:比较hsBLyS单体和三聚体对B淋巴细胞增殖变化,确认hsBLyS主要是以三聚体形式发挥生物学活性。 3 hsBLyS对离体脾脏B淋巴细胞分化的作用 实验分两个系列。系列一:将分离的脾脏细胞悬液加入24孔细胞培养板,随机分为对照组、2.5μg/ml hsBLyS组、2.5μg/ml anti-IgM组和2.5μg/mlhsBLyS+2.5μg/ml anti-IgM组,每组3个平行孔,分别加入PBS、hsBLyS和/或anti-IgM工作液,培养72h。系列二:分组同系列一,只是在加入工作液培养24h之后,吸去各孔上清再加入LPS继续培养48h。培养结束后,各孔加入anti-CD45R/B220和anti-CD21单克隆荧光抗体标记,流式细胞仪分析hsBLyS对B淋巴细胞分化的影响。结果表明:加入hsBLyS诱导B淋巴细胞总体数量明显高于对照组;B220+CD21loB淋巴细胞（T1 B淋巴细胞）数量虽略高于对照