目的:1.构建大肠癌细胞HCT116和HT29干细胞(CSCs)微球模型,并通过大肠癌CSCs标记物CD133、CD44、Lgr5进行鉴定,观察大肠癌CSCs标记物CD133、CD44、Lgr5在微球中的表达情况;观察HCT116和HT29CSCs的侵袭、转移能力;观察抑癌方对大肠癌HCT116和HT29CSCs侵袭、转移能力的影响;2.构建VHL高表达HCT116稳转株,观察VHL对HCT116CSCs微成球能力,侵袭,转移能力,侵袭、转移瘤形成能力的影响;观察VHL对HCT116CSCs标记物CD133、CD44、Lgr5的影响;观察抑癌方是否能作用于VHL并增强其效应。方法:1.HCT116和HT29两种大肠癌细胞系,采用无血清培养微球的方法构建大肠癌干细胞(CSCs)模型,并在含血清的条件下诱导其分化;2.通过流式细胞技术和Western blot技术对大肠癌CSCs标记物CD133、CD44、Lgr5进行鉴定,用单层贴壁细胞作为对照组,检测CSCs标记物表达情况;3.用单层贴壁细胞作为对照组,采用Transwell的方法,观察大肠癌CSCs的侵袭、转移能力;4.观察抑癌方对大肠癌CSCs微成球能力,侵袭、转移能力,干细胞标记物CD133、CD44、Lgr5表达量,裸鼠尾静脉注射CSCs侵袭、转移瘤形成能力的影响;5.采用慢病毒感染的方法构建大肠癌HCT116VHL高表达稳转株,以VHL空载慢病毒感染大肠癌HCT116作为对照组,观察VHL高表达对大肠癌HCT116干细胞微成球能力的影响;6.用VHL空载慢病毒感染大肠癌HCT116作为对照组,采用Transwell的方法,观察大肠癌HCT116VHL高表达稳转株CSCs的侵袭、转移能力,裸鼠尾静脉注射CSCs侵袭、转移瘤形成能力;7.通过流式细胞技术和Western blot技术对大肠癌HCT116VHL高表达稳转株CSCs标记物CD133、CD44、Lgr5进行鉴定,用VHL空载慢病毒感染大肠癌HCT116作为对照组,检测VHL高表达对CSCs标记物CD133、CD44、Lgr5的影响;8.观察抑癌方对大肠癌HCT116VHL高表达稳转株CSCs微成球能力,侵袭、转移能力,干细胞标记物CD133、CD44、Lgr5表达量,裸鼠尾静脉注射CSCs侵袭、转移瘤形成能力的影响。结果:1.HCT116和HT29肠癌干细胞侵袭、转移细胞数多于单层贴壁细胞,大肠癌干细胞标记物CD133、CD44、Lgr5较单层贴壁细胞表达量增高;2.抑癌方能抑制HCT116和HT29肠癌CSCs微球数目和大小,侵袭、转移细胞数,干细胞标记物CD133、CD44、Lgr5表达量,裸鼠尾静脉注射CSCs侵袭、转移瘤数目和大小;3.VHL高表达抑制大肠癌HCT116CSCs的微成球数目和大小,侵袭、转移细胞数,干细胞标记物CD133、CD44、Lgr5表达量,裸鼠尾静脉注射CSCs侵袭、转移瘤数目和大小;4.抑癌方能促进VHL表达。结论:1.大肠癌CSCs比单层贴壁细胞具有更强的微成球能力,侵袭、转移能力且干细胞标志物的表达量增多;2.VHL能抑制大肠癌CSCs的干性,从而抑制大肠癌CSCs的微成球能力,侵袭、转移能力,干细胞标志物的表达量,进而抑制大肠癌CSCs侵袭、转移瘤的形成;3.抑癌方能抑制大肠癌CSCs的干性,从而抑制大肠癌CSCs侵袭、转移瘤的形成,抑癌方可以促进VHL表达并增强其效应。