【摘 要】
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中药在畜禽疾病的防治中有着重要作用,尤其对一些免疫抑制病毒性疾病和应激性疾病具有独特优势。由于抗病毒化学治疗药物已禁用于食品动物,因而开展抗病毒中药的研究更凸显其
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中药在畜禽疾病的防治中有着重要作用,尤其对一些免疫抑制病毒性疾病和应激性疾病具有独特优势。由于抗病毒化学治疗药物已禁用于食品动物,因而开展抗病毒中药的研究更凸显其重要性和迫切性。玉屏风多糖(YuPingFeng polysaccharides,YPF-P)为玉屏风散总多糖有效部位群,具有多方面增强机体免疫、抑制病毒感染的功能。目前已有大量研究从体液免疫、细胞免疫等方面对玉屏风多糖的作用机制展开了研究,但是玉屏风多糖抗病毒机制尚鲜见报道,亟待加强其研究力度。本项目引入血清药理学理念,在国内外首次进行玉屏风多糖及其含药血清的体外抗病毒研究,以新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染鸡胚和鸡胚成纤维细胞,探索YPF-P及其含药血清的抗病毒机制。本试验采用下面几个方法。1.采用水提醇沉法提取YPF-P,经大孔树脂纯化,真空冷冻干燥。2.含药血清的制备和细胞毒性检测:对SPF兔采用最佳剂量YPF-P灌服给药,于1、3、5、7 d采集全血,制备不同浓度含药血清;培养原代SPF鸡胚成纤维细胞,分别加入不同浓度的YPF-P及其含药血清,进行细胞毒性实验,观察细胞病变,检测细胞活性。3.YPF-P及其含药血清抗NDV作用的检测:采用3种不同给药方式检测抗NDV作用,分别观察YPF-P及其含药血清对病毒的阻断、抑制和直接杀灭作用;培养原代SPF鸡胚成纤维细胞,于接种NDV病毒前、后和同时,分别进行细胞毒性实验,观察细胞病变,MTT法检测细胞活性。4.YPF-P对NDV感染细胞凋亡影响和机制的研究:培养原代SPF鸡胚成纤维细胞,细胞爬片,检测CEF凋亡细胞率、Caspase-3、P53、Bcl-2/Bax、TNF-α等凋亡调控基因的表达变化。YPF-P提纯率为91.01%。NDV鸡胚半数致死浓度为1:10~7。与正常对照组相比,不同浓度YPF-P(0.625、1.25、2.5、5、10 mg/mL)和YPF-P含药血清(0、1、3、5、7 d)的鸡胚成纤维细胞活性均显著增强(P<0.05或0.01),细胞生长良好。鸡胚成纤维细胞培养24 h后,YPF-P抑制病毒作用明显,与NDV对照组相比差异极显著(P<0.01);YPF-P含药血清组细胞活性较正常和阳性对照组较低(P<0.01),可有效的减弱病毒毒性,三种给药方式与阴性NDV对照组相比,含药血清组细胞活性均显著高于NDV对照组,差异极显著(P<0.01);YPF-P能通过抑制凋亡蛋白的表达来阻断细胞凋亡的发生。YPF-P及其含药血清均对细胞无毒副作用,且可显著增强细胞活性;YPF-P能够阻断NDV的吸附和进入,对鸡胚成纤维细胞有较好的保护作用;YPF-P含药血清不但可阻断NDV对鸡胚成纤维细胞的吸附和侵入,还可较好地抑制病毒的毒性,干扰NDV的合成和释放,其体外抗NDV效应高于YPF-P。
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