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目的:本实验通过母婴分离(MS),慢性不可预知性应激(CUMS)和母婴分离联合慢性不可预计性应激(MS+CUMS)来制备抑郁模型,观察成年Sprague-Dawley(SD)大鼠在体重和行为上的影响,并验证模型的有效性以及早期母婴分离是否会增加后期应激成年大鼠的抑郁样行为;探讨四逆散防治MS+CUMS诱导的大鼠抑郁样行为的作用和机制,为临床上四逆散治疗抑郁症患者,尤其是具有不良生活压力病史的成人抑郁症提供可靠的实验依据。方法:将40只新生雄性SD大鼠随机分为四组:空白(Control),母婴分离(MS),慢性不可预知性应激(CUMS)和母婴分离联合慢性不可预知性应激组(MS+CUMS),每组10只。PND1-21期间,MS和MS+CUMS组大鼠进行母婴分离,空白组和CUMS组不干预。每天分离时间共360分钟,在09:00-12:00和14:00-17:00有规律的各分180分钟。从PND28开始至PND60,除空白跟MS大鼠外,每天对MS+CUMS和CUMS大鼠施加一种随机应激。在PND53-PND59期间,通过蔗糖偏爱,旷场实验和强迫游泳测试评估抑郁大鼠模型的效果。将60只新生雄性SD大鼠随机分为六组,每组10只:空白组(Control),MS+CUMS模型组(Model),MS+CUMS+氟西汀组(Positive:5mg/kg),MS+CUMS+四逆散低剂量组(SNS-Low:2.5g/kg),MS+CUMS+四逆散中剂量(SNS-Medium:5g/kg)和 MS+CUMS+四逆散高剂量(SNS-High:10g/kg)。除空白组外,其余大鼠在PND1-21期间每天进行两次持续3小时母婴分离应激;从PND60开始到PND100,药物治疗大鼠每天接受一个随机的应激和治疗。糖水偏爱实验,旷场试验和强迫游泳试验用来评估四逆散对大鼠行为变化的影响。采用Nissl染色来检测海马(HIP)和前额叶(PFC)中神经元的数量,免疫组化检测CaSR和Syn在海马和前额叶的表达。蛋白印迹检测海马和前额叶中的钙敏感受体(CaSR),蛋白激酶C(PKC),ERKI/2和突触相关蛋白[PSD-95,GAP-43和突触素(Syn)]水平。结果:(一)母婴分离增加CUMS大鼠的抑郁样行为1.体重:与对照组相比,CUMS,MS和MS+CUMS组的体重增加明显减少(P<0.05);与MS组相比,MS+CUMS组的大鼠体重增加(P<0.05)。2:蔗糖偏爱:与对照组相比,MS,CUMS和MS+CUMS组的糖水偏爱显着降低(P<0.05)。与MS和CUMS组相比,MS+CUMS组仅有下降的趋势无显著性差异(P<0.05)。3.强迫游泳试验:与正常组相比,MS,CUSM和MS+CUMS组大鼠的不动时间显着增加(P<0.05)。与MS和CUMS组的不动时间相比,MS+CUMS组的不动时间明显增加(P<0.05)。4.旷场试验:与正常组,MS和CUMS大鼠相比,MS+CUMS组的总距离明显减少(P<0.05)。但在中央时间上,与空白组相比,仅MS+CUMS组的中央时间显著减少,其他两组无统计学意义(P>0.05)。与MS和CUMS相比,MS+CUMS的中央时间仅有下降的趋势,但无统计学差异(P>0.05)。(二)四逆散对MS+CUMS模型大鼠CaSR调节突触可塑性相关通路的影响1.体重:与空白组对比,模型大鼠的体重增长显著减少(P<0.05);经40天治疗,所有药物组大鼠的体重增长明显高于模型组(P<0.05)。2行为学:与对照组相比,模型组的蔗糖偏爱度(P<0.01)和中心区时间(P<0.05)显着降低,并且不动时间明显延长(P<0.01);但,模型组大鼠的总距离在旷场实验与正常组相比仅呈现出下降趋势,无统计学意义(P>0.05)。与模型组相比,药物干预组的蔗糖偏爱度(P<0.01),中心区时间和总距离显着增加(P<0.05)。此外,与模型组相比,四逆散和阳性组大鼠的固定时间明显减少(P<0.01)。3尼氏染色:与对照组相比,模型组的神经元排列松散,数量少,缺乏明显清晰的神经元轮廓;与模型大鼠相比,四逆散和阳性药治疗组的神经元排列整齐,形态正常,边界清晰,神经元数量明显增加(P<0.05)。4免疫组化:与正常组相比,模型组大鼠海马和前额叶中CaSR和Syn阳性面积百分比明显降低(P<0.05)。在海马和前额叶中,与模型组相比,通过四逆散和阳性药治疗,CaSR和Syn阳性面积百分比明显增加(P<0.05),四逆散低剂量的海马中Syn阳性区域的百分比呈增加趋势,但无统计学意义。5.免疫印迹:与正常大鼠相比,模型组海马和前额叶中CaSR,PKC,ERK1/2,PSD-95,GAP-43和Syn蛋白的表达水平明显下调;与模型的应激大鼠相比,四逆散和氟西汀治疗明显上调CaSR,PKC,ERK1/2,PSD-95,GAP-43和Syn的蛋白水平(P<0.05)。结论:1.母婴分离联合慢性不可预知性应激诱发大鼠抑郁样及焦虑样行为。2.母婴分离能够增加CUMS大鼠的抑郁样行为。3.四逆散通过CaSR-PKC-ERK信号通路增强突触可塑性来改善应激大鼠的抑郁样行为。