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目的:检测YAP相关蛋白在不同前列腺癌细胞中具有干细胞特性的细胞的具体表达情况。利用基因干扰技术,通过对YAP相关基因进行调节,观察前列腺癌干细胞特性在体内及离体的表达的变化。进而探讨YAP通过调节下游干细胞特性的Sox-2、OCT-4等的表达,影响前列腺癌干细胞特性及自我分化作用能力。方法:实验包括体内实验和离体实验。离体实验是利用干细胞特有标记抗体蛋白的免疫磁珠,分选相应具有干细胞特性前列腺癌细胞的方法,用干细胞标记蛋白CD133抗体以及CD44抗体,分别在LNCaP细胞中筛选出具有干细胞特性前列腺癌细胞。再利用shRNA技术,分别在CD133高表达﹑CD133正常表达﹑CD133低表达的LNCaP细胞中抑制YAP的表达。利用不表达YAP的前列腺癌干细胞进行球形成实验,验证YAP与肿瘤干细胞特性之间的密切联系。同时检测YAP敲除的细胞系。比较OCT4,Nanog,Cmet,CD133,CD44和Sox2的mRNA表达水平。利用人工合成的YAP突变体质粒,即野生型YAP结合域突变体,YAP/TEAD结合域突变体,YAP/WW域突变体和SH3域突变体YAP分别转染至C42细胞及LNCaP细胞中当中,通过蛋白免疫印迹实验证明YAP与肿瘤干细胞的特有标记物OCT4,Nanog,CD133和Sox2之间的作用机制。进而进一步证实YAP的结合域TEAD对YAP调节细胞的自我更新能力的作用。而体内实验则是在去势组和非去势组TRAMP转基因鼠体内分别注射VP和DMSO并取瘤,研究YAP通过对OCT4,Nanog,CD133和Sox2这些肿瘤干细胞标记蛋白的调控,进而影响前列腺癌干细胞特性及自我更新能力。结果:1.通过检测YAP敲除的LNCaP细胞中干细胞相关分子标记物,可以发现YAP对在体内外维持前列腺癌细胞的自我更新和去分化是必要的。2.对前列腺癌细胞系进行插入YAP的各个结合域突变质粒后检测发现,YAP调节细胞的自我更新依赖于YAP定义域的TEAD交互区域。3.在TRAMP转基因鼠的体内模型上,我们发现,在阻遏YAP信号通路能够增加ADT的治疗作用。结论:YAP对在体内外维持前列腺癌细胞的自我更新和去分化是必要的,YAP调节细胞的自我更新依赖于YAP定义域的TEAD交互区域。YAP与其下OCT4,Nanog和Sox2等肿瘤干细胞标记物之间的相互作用,有望成为前列腺癌发展及转移的新的关键分子机制。阻遏YAP信号通路能够增加ADT的治疗作用。此外,YAP有可能作为一种新的肿瘤标记物,为临床诊治前列腺癌的新方法奠定基础,对判断预后有重要作用,也提出了治疗晚期转移性前列腺癌的新的思路。