草果醇提物体外抗氧化及改善2型糖尿病大鼠肝氧化损伤的研究

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目的本研究以姜科植物草果(Amomum tsao-ko Crevost et Lemarie)为原料,对其中的黄酮类化合物进行提取和物质鉴定,并评估其体外抗氧化活性。然后建立高脂高糖饮食联合链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导的2型糖尿病(Type 2diabetes mellitus,T2DM)大鼠模型,使用草果醇提物灌胃干预6周,探讨草果对T2DM大鼠肝氧化损伤的影响。方法草果样品经过清洗、干燥、粉碎、四氯化碳处理得草果脱脂干粉,使用甲醇(料液比=1:10)进行提取,采用改进的Dowd方法测定草果醇提物中的黄酮含量,采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术对其中的黄酮类化合物进行鉴定,然后利用氧自由基吸收能力(Oxygen radical absorption capacity,ORAC)、ABTS自由基清除能力和铁离子还原能力(Ferric-reducing antioxidant power,FRAP)3种方法评价草果醇提物的体外抗氧化活性。42只6周龄的SD雄性大鼠适应性喂养1周后,随机分成两组:正常对照组(NC组,8只)和模型组(Mod组,34只),两组大鼠分别给予普通饲料和高脂高糖饲料喂养。第6周,Mod组大鼠按35 mg/kg体重注射STZ溶液,构建T2DM模型。将造模成功的T2DM大鼠随机分为模型对照组(MC组)、草果组(AT组)和二甲双胍组(Met组)。AT组和Met组大鼠分别使用草果醇提物和二甲双胍灌胃干预,干预剂量为100 mg/(kg·d),NC组和MC组大鼠根据体重使用生理盐水灌胃,干预时间为6周。期间记录大鼠体重变化,实验结束后对腹主动脉进行采血,收集肝组织。计算肝脏系数,检测血清中谷丙转氨酶(Alanine transaminase,ALT)和谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)含量,检测肝脏组织中肝糖原含量、己糖激酶(Hexokinase,HK)和丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)活力;氧化应激指标总抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)和丙二醛(Malondialdehvde,MDA)水平,对肝脏组织进行HE染色观察其形态学变化。结果1.草果醇提物中的黄酮含量为1.21 mg QE/g DW。UPLC-MS/MS的正负离子模式下共鉴定出29种黄酮类成分,其中包括6种黄酮醇,分别是桑色素(8)、二氢杨梅素(9)、瑞诺甙(12)、山柰酚(18)、异鼠李素(19)和异落新妇苷(26);3种黄烷醇,分别是表没食子儿茶素3-没食子酸酯(6)、(+)-儿茶素(17)和(-)-表儿茶素(22);3种黄酮,分别是川陈皮素(2)、桑皮黄素(16)和异夏佛塔苷(27);3种黄烷酮,分别是甘草素(10)、花旗松素(11)、和补骨脂二氢黄酮(23);还鉴定出了原花青素B1(1)、原花青素B2(3)和槲皮素3-O-槐苷-7-O-鼠李糖苷(29)等黄酮类化合物。2.草果醇提物具有良好的体外抗氧化活性,ORAC值为34276.57μM TE/100 g DW,ABTS自由基清除的IC50为3.49 mg/m L,FRAP值为207.42μM Fe2+/g DW。3.对T2DM大鼠肝脏重量和肝脏系数的影响:各组大鼠肝脏重量之间无明显差异。MC组大鼠的肝脏系数高于NC组(P(29)0.05),经过草果醇提物干预6周后,AT组大鼠肝脏系数较低于MC组,但差异无统计学意义(P(29)0.05)。4.对T2DM大鼠肝功能的影响:第5周和第7周,各组大鼠血清ALT和AST含量之间的差异无统计学意义(P>0.05)。第13周,MC组大鼠血清ALT和AST水平均高于NC组(P<0.05),草果醇提物干预6周后,AT组和Met组的ALT、AST水平均低于MC组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。5.对T2DM大鼠肝糖原含量及合成的影响:MC组大鼠肝糖原含量、HK和PK活力低于NC组,差异具有统计学意义(P<0.05),草果醇提物干预6周后,AT组和Met组大鼠肝糖原含量、HK和PK活力均高于MC组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。6.对T2DM大鼠肝脏氧化应激的影响:MC组大鼠肝脏T-AOC、SOD、GSH-Px和CAT活性均低于NC组,差异均具有统计学意义(P<0.05),草果醇提物干预6周后,AT组大鼠肝脏T-AOC、SOD、GSH-Px和CAT活性均高于MC组,差异均具有统计学意义(P<0.05),Met组大鼠肝脏T-AOC、GSH-Px和CAT活性均高于MC组,差异均具有统计学意义(P<0.05),Met组大鼠SOD活性高于MC组,但差异不具有统计学意义(P>0.05)。MC组大鼠肝脏MDA水平高于NC组,差异具有统计学意义(P<0.05),AT组、Met组肝脏MDA水平低于MC组,差异具有统计学意义(P<0.05)。7.对T2DM大鼠肝脏形态学的影响:MC组大鼠肝组织结构紊乱,肝细胞水肿,胞质疏松,部分细胞出现脂肪变性。草果醇提物干预6周后,AT组大鼠肝组织紊乱程度减轻,肝细胞形态及脂肪变性程度有改善。结论1.草果醇提物中含有丰富的黄酮类化合物,具有良好的体外抗氧化活性。2.草果醇提物能够改善T2DM大鼠肝功能损伤,增加肝糖原含量,促进糖原合成,减轻肝脏氧化应激水平。3.草果醇提物对T2DM大鼠肝脏病理损伤具有保护作用。
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