用水稻的花药愈伤组织作为受体的转化研究

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本实验选用水稻花药愈伤组织作为转化的受体,利用农杆菌介导法将已克隆的具有水稻白叶枯病广谱抗性的基因,Xa21,导入台北309、日本晴、中花11、中花9四个品种中。 花药愈伤组织对其四种品种诱导分析,本实验共获得31株绿苗,其中台北309有14株,日本晴为13株,中花11为1株,中花9为3株。对25株植株经过形态观察,染色体计数,FISH三种方法综合鉴定。 对T0代中28株再生植株进行了PCR检测。有24株验证为阴性。对PCR检测呈阳性的15株再生植株做Southern检测。分别用限制性内切酶EcoRⅤ和Hind III进行酶切。经检测证明外源DNA已经整合到这15株再生植株的基因组中。挑选出2个经PCR和Southern验证为阳性的台北309的单倍体再生植株,用其根尖细胞染色体作荧光原位杂交。杂交信号分别出现在一个单倍体的1号染色体上和另一个单倍体的2号染色体上,显示出外源基因片段的插入位点。 对23株T0代再生植株接水稻白叶枯菌P6小种后进行田间抗性检测。其中有19株抗病,2株感病,2株中抗。 对已经收到种子的4个台北309二倍体株系的T1代进行了PCR和田间抗性检测,有两个株系后代经Χ2测验验证分离比符合3∶1,还有两个株系后代分离比无法用孟德尔遗传定律解释。4个二倍体T0代植株都为杂合二倍体。
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