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目的:通过研究疏风舒腰颗粒对腰椎间盘突出症SD大鼠模型背根神经及腰段脊髓的影响,分别从形态学、细胞和分子生物学水平上说明疏风舒腰颗粒抗炎镇痛、活血化瘀的相关作用机制。 方法:1.腰椎间盘突出症模型的制备和分组:40只成年SD大鼠随机分成四组:空白组、模型组、中药组和西药组。造模取自体尾椎髓核涂于其右侧第5腰椎神经根表面并置于内侧,正常组仅暴露右侧第5腰椎神经根。2.痛阈测定:各组大鼠分别于术前1天、术后第1、3、7、14、28天测定大鼠术侧后足足底的热痛和机械痛的阈值。3.免疫组织化学(IHC)法测定:取右侧腰5神经根,然后固定、脱水、包埋、切片,备用。IHC测定各组神经根组织中TNFα和VEGF的表达情况,使用ImageJ软件对各组IHC切片进行分析,以平均灰度值(meangrey value,MGV)表示单位面积内阳性物质的含量。4.PCR检测:在冰块上取各组大鼠腰段脊髓,生理盐水浸洗后,置于液氮或-80℃保存备用。采用TProfessional basic PCR扩增仪对各组脊髓组织进行测定TNFα和VEGF基因转录的情况。5.Western-blot(WB)检测:在冰块上取各组大鼠腰段脊髓,生理盐水浸洗后,置于液氮或-80℃保存备用。采用WB法对各组脊髓组织进行测定TNFα和VEGF蛋白表达的情况。采用ImageJ软件对免疫印迹的阳性条带进行灰度值测定,以TNFα、VEGF和GAPDH条带的平均灰度值的比值(the ratio of the meangrey value,RMGV)代表TNFα和VEGF蛋白表达的相对水平。6.统计学处理:用SPSS17.0分析软件对数据进行分析处理. 结果:1.空白组大鼠机械刺激和热刺激痛阈值无明显差异(p>0.05);模型组机械刺激和热刺激痛阈值一直处于降低趋势,与空白组比较皆有差异(p<0.01),表示造模成功;中药组和西药组机械刺激和热刺激痛阈值在术后的两周内有降低的趋势,且与模型组比较皆有差异(p<0.05),说明中药组和西药组皆有治疗效果;中药组与西药组比较无明显差异(p>0.05)。 2.在TNFα的MGV结果中,空白组与模型组统计学有差异(p=0.002),表明造模成功。中药组和西药组与模型组比较皆有统计学差异(p<0.001,p<0.001),中药组和西药组之间比较无统计学差异(p=0.722)。在VEGF的MGV结果中,空白组与模型组无统计学差异(p=0.549)。中药组与模型组之间差异有统计学意义(p<0.01),西药组与模型组之间差异有统计学意义(p<0.001)。西药组和中药组两组进行比较后差异无统计学意义(p>0.05)。 3.在TNFα的基因表达结果中,空白组、中药组和西药组与模型组比较皆有统计学差异(p<0.001,p<0.001,p<0.01),中药组和西药组之间比较有统计学差异(p<0.01)。在VEGF的基因表达结果中,空白组与模型组无统计学差异(p=0.111)。中药组与模型组之间差异有统计学意义(p<0.001),西药组与模型组比较之间也有统计学意义(p<0.001)。且两用药组比较亦有统计学差异(p<0.001)。 4.在TNFα的RMGV结果中,空白组、中药组和西药组与模型组比较皆有统计学差异(p<0.05,p<0.001,p<0.001),中药组和西药组之间比较有统计学差异(p<0.001)。与以上的PCR检测基因所得出的结果相符合。在VEGF的RMGV结果中,空白组与模型组无统计学差异(p=0.789)。中药组与模型组比较差异有统计学意义(p=0.002),西药组与模型组比较差异也有统计学意义(p<0.001)。且两用药组比较亦有统计学差异(p=0.001)。与以上的PCR检测基因所得出的结果相符合。 结论:1.采用自体尾椎髓核涂于其右侧第5腰椎神经根表面、并置于内侧的LDH大鼠模型造模成功。 2.疏风舒腰颗粒对LDH模型大鼠有恢复痛阈的作用,其作用机制可能有镇痛。 3.疏风舒腰颗粒可以使TNFα表达降低,VEGF表达升高,起到协同作用,共同达到抗炎镇痛、活血化瘀的作用。