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灵菌红素是一类发现于多种细菌、放线菌中的红色抗生素,由一些放线菌、沙雷氏菌及其它细菌产生的次级代谢产物,包括prodigiosin, prodigiosin 25-C, metacycloprodigiosin(MP), desmethoxyprodigiosi,uncedylprodigiosin(UP), Cycloprodigiosin (CPrG)等。其中,UP已经被发现具有免疫抑制活性,但其抗肿瘤活性研究较少。前期初步的活性筛选发现UP能抑制多种肿瘤细胞的增殖,其中对P388细胞的抑制作用尤为明显。本文进一步检测UP对P388细胞的抑制作用,并对其作用机制进行探讨。MTT法测定UP对小鼠白血病细胞P388的增殖抑制作用,发现UP能显著抑制P388细胞的增殖,IC50为42 nM,流式细胞术对细胞内DNA含量进行检测,结果显示UP将P388细胞周期阻滞于G2/M期,并且引起细胞核DNA剪切；同时,UP能引起周期素Cyclin B1表达量增加。进一步采用Western blot检测PARP的裂解情况,PARP的检测结果和DNA含量的检测结果都显示UP诱导P388细胞发生凋亡；流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位,发现UP使细胞的降低；进一步观察了UP对P388细胞线粒体Cyt C释放以及Caspase-8、9、3剪切的影响,发现UP能引起P388细胞线粒体细胞色素C释放到胞浆并且使Caspase-8、9、3发生剪切,表明死亡受体途径和线粒体途径参与了UP诱导的P388细胞凋亡。为了进一步探讨UP诱导P388细胞凋亡的机制,首先应用激光扫描共聚焦显微镜对UP进行细胞定位；采用Western Blot法对上游的细胞信号分子AKT、MAPK家族成员进行观察,发现UP对AKT激活无影响,但能明显促进信号分子ERK、P38和JNK的活化；引入ERK、P38和JNK的抑制剂,发现ERK抑制剂不能逆转UP引起的增殖抑制而P38和JNK抑制剂能明显逆转UP引起的细胞增殖抑制,同时发现ERK抑制剂对UP导致的P388周期阻滞无明显影响,而JNK及P38抑制剂对UP导致的P388周期阻滞有恢复作用。流式细胞仪法测定细胞内活性氧水平的变化,发现UP使P388细胞内活性氧的含量仅少量增加,氧化抑制剂NAC不能逆转UP引起的增殖抑制。采用pH值探针流式细胞仪测定细胞内pH的变化；同时采用AO染色观察细胞内的酸性细胞器的变化；结果发现UP能够降低P388细胞内的pH值,并且使AO染色后的酸性细胞器消失；引入酸化抑制剂咪唑,发现其不能够逆转UP引起的增殖抑制。非变性电泳法分离出细胞内与UP结合的蛋白,分离出的蛋白质进行质谱检测；质谱鉴定出的951种蛋白进行分析,发现其中171种是核糖体相关蛋白,推测UP进入P388细胞后可能和核糖体结合,接下来采用核糖体蛋白L3的抗体对细胞中的化合物UP进行共定位观察,发现核糖体和化合物UP有较好的共定位,说明UP进入P388细胞后可能是和核糖体结合。研究结果表明：UP通过诱导P388细胞凋亡而发挥增殖抑制作用,UP诱导P388细胞凋亡与MAPK激活及G2/M期阻滞有关,核糖体可能是UP在P388细胞内的作用靶点,为UP作为抗肿瘤先导化合物的进一步开发提供理论基础。