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目的:探讨PDX1过表达是否能够影响PANC-1细胞对吉西他滨的敏感性。方法:(1)从Hela细胞中获取PDX1基因并将其构建到PCMV6-Entry空质粒上形成PCMV6-Entry-PDX1重组质粒。(2)培养人胰腺癌PANC-1细胞,待细胞生长状态良好时种入24孔板,分别将PCMV6-Entry空质粒和PCMV6-Entry-PDX1重组质粒利用脂质体Lipo3000转入PANC-1细胞中,48h后加入G418筛选2周形成稳定的过表达细胞。(3)将稳定的过表达细胞扩大培养,待细胞生长状态良好后种入24孔板中,培养72h提取总蛋白检测PDX1表达情况及对PI3K-AKT是否有影响(4)将转染细胞分别种入96孔板中,并用0,10,100,200,400u M浓度的吉西他滨分别作用48h和72h。MTS法在490nm处测定其吸光值。结果:(1)成功获取PDX1基因并将其构建到PCMV6-Entry空质粒上形成PCMV6-Entry-PDX1重组质粒,测序结果显示,重组质粒序列正确。(2)经Western blot分析显示成功构建了PDX1过表达PANC-1细胞,且其能够下调p-AKT的水平,说明其在一定程度上能够抑制PI3K-AKT信号通路。(3)MTS法分析吉西他滨对过表达细胞增殖的影响显示:与空质粒组相比较,48h和72h时PDX1过表达细胞增殖受到抑制,具有时间依赖性但是没有剂量依赖性。结论:PDX1能够提高胰腺癌细胞PANC-1对吉西他滨的敏感性,具有时间依赖性但是不具有剂量依赖性。目的:探讨IL-15对胰腺癌细胞PANC-1的增殖和凋亡的影响。方法:(1)利用PCR检测PANC-1细胞IL-15受体的表达情况。待细胞状态良好时,将其种入细胞板中。24h后分别用0,4,12,36,108,216 ng/ml浓度的IL-15作用细胞。(2)MTS法测不同浓度IL-15对PANC-1细胞增殖的影响。(3)流式细胞仪检测不同浓度IL-15作用PANC-1细胞72 h对细胞凋亡的影响。(4)Western blot分析不同浓度IL-15对PANC-1细胞凋亡蛋白Bax,Bcl-2,Caspase 3及周期蛋白Cyclin E等的变化。(5)利用单一浓度IL-15作用PANC-1细胞分别为0,1,6,12,24,48,72 h并检测凋亡蛋白Bax,Bcl-2,Caspase 3及周期蛋白Cyclin E等的变化。结果:(1)PANC-1细胞表达IL-15受体α亚单位而不表达β和γc亚单位。(2)MTS结果显示:不同浓度IL-15作用PANC-1细胞48h与空白对照组相比没有统计学差异,作用72 h与空白对照组比较低剂量没有抑制作用,而高剂量有抑制作用(3)流式分析结果显示:低剂量IL-15对PANC-1没有促进凋亡的作用而高剂量具有促进凋亡的作用,浓度越高凋亡越明显。(4)Western blot分析显示:IL-15能够上调Bax,Caspase 3的表达降低Bcl-2的表达,同时能够抑制p-AKT的表达。(5)结果显示:随着时间增加BAX和Caspase 3表达增加而Bcl-2降低。6,12,24,48h组Cyclin E表达增加而72 h时表达降低与空白对照组相比没有统计学差异。p-AKT在1,6,12,24,48,72 h表达降低与对照组相比有统计学差异,p-STAT3在24,48和72 h表达增加与对照组相比具有统计学差异。结论:IL-15能够抑制PANC-1细胞的增殖呈时间和剂量依赖性,也能够诱导PANC-1细胞的凋亡。