蓝藻属光合自养生长，培养条件简单，成本低廉，只需光、CO2、无机盐和合适的温度就能生长，适于大规模生产。用蓝藻为表达宿主制备hTNF-α口服保健品，可以避免大肠杆菌产生内毒素、表达产物生成包涵体等弊端，能降低下游生产成本。 人肿瘤坏死因子-α(humantumornecrosisfactorα,hTNF-α)对肿瘤组织和肿瘤细胞有特异的杀伤作用，是迄今为止唯一能够直接杀死肿瘤细胞的天然因子，可能成为极有前景的抗癌药。 本文用5L瓶培养转hTNF-α基因的鱼腥藻7120(Anabaenasp.PCC7120)，进行藻体破碎及一系列处理分离和纯化hTNF-α，得到了从转基因鱼腥藻中获得一定纯度hTNF-α的优化条件。实验结果如下： 1.用装有4LBG-11培养液的5L大瓶，培养转hTNF-α基因的鱼腥藻7120(Anabaenasp.PCC7120)，90μmol/m2.s-1光照下培养，其24d时表达量最高，是收集藻细胞的最佳时期。 2.通过提取缓冲液及蓝藻细胞破碎方法的筛选，得出hTNF-α的最佳溶出条件为：0.05mol/L的pH7.5Tris-HCl缓冲液，NaCl0.2mol/L，EDTA0.01mol/L；超声波法破碎最佳条件：超声功率为800W，间歇时间为1s，工作时间为0.5s，湿藻与破碎液的质量体积比为1:15，总超声时间为8min，超声一次；冻融处理的最佳条件：体积最好＜1.5mL，先在-20℃冻存过夜(12h)，融化后离心取上清，然后再在藻体中加入同样体积的破碎缓冲液-20℃冻2h，融化后离心取上清，两次上清合并。 3.用温度和盐析对粗提液进行初步纯化，确定出最佳的处理温度为：55℃处理30min；最佳的盐析条件为：蛋白浓度为1.2～1.8mg/mL，最好接近1.8mg/mL，温度为4～18℃，硫酸铵分级沉淀范围为：30﹪～60﹪，pH为6.5；最佳的初步纯化工艺为：将蛋白粗提液先用30﹪饱和度的硫酸铵处理1h后，然后直接用温度55℃处理30min，12,000r/min离心30min，将上清再用60﹪饱和度的硫酸铵处理1h，12,000r/min离心30min收集沉淀hTNF-α，用上柱缓冲液溶解。其hTNF-α回收率能达到86.83﹪，并可将约91.2﹪的杂蛋白去除，纯度达到4.54﹪，纯化倍数为9.880。 4.离子交换层析：比较了几种离子交换填充柱材料的纯化效果；最后选择用DEAE-SephadexA50，然后又对洗脱液的最佳洗脱NaCl梯度和方式作了筛选。选择出最佳的NaCl洗脱方式为阶段洗脱。能使hTNF-α的回收率达到75.67﹪，纯度达到45.36﹪，纯化倍数为29.36。