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BMP-4(bone morphogenetic protein 4)是转化生长因子β(TGF-β)超家族成员之一，具有促进软骨和骨组织形成的作用，在治疗骨折和骨缺损等方面具有极大的临床应用价值。因此本研究利用基因工程生产人BMP-4成熟肽。 采用细胞裂解液法自毛发提取基因组DNA，通过PCR法扩增出编码人骨形态发生蛋白4(BMP-4)成熟肽的DNA序列，克隆到载体pUCm-T中。在此基础上，将编码人骨形态发生蛋白4(BMP-4)成熟肽的基因片段分别克隆到pBV220、pGEX-3X和pET42a载体上进行原核表达，并且克隆到pIC9酵母分泌型表达载体上，为BMP-4的真核表达奠定基础。 重组的表达载体pBV220／hBMP-4转化到大肠杆菌DH5α中诱导表达。经条件优化后，非融合蛋白产量为29.7mg／L培养基，主要存在于包涵体中，包涵体溶解复性后占包涵体总蛋白的85.5％，占菌体总蛋白的17.4％。经Westernblotting鉴定在成熟肽相应部位有特异条带，体外实验证明复性后的重组bBMP-4具有生物活性。 重组质粒pGEX-3X／hBMP-4和pET42a／hBMP-4分别转化到大肠杆菌DH5α和E.coliBL21(DE3)pLysS中诱导表达。经条件优化后，可溶性融合蛋白产量分别为5.85mg／L培养基和18.00mg／L培养基，经Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化后并在Xa因子作用下，产生N端多三个氨基酸的重组hBMP-4成熟肽和完整的重组hBMP-4成熟肽。通过Western blotting证明在成熟肽相应部位有特异条带，体外实验亦证明重组hBMP-4具有生物活性。 本实验结果显示： 1、自发根可以提取出满足PCR需要的DNA；产天津医科大学博士学位论 2、国人bmP一4基因中编码hBMp一成熟肤的DNA序列，与白种人的序列 无差别; 3、利用原核非融合表达系统成功的表达了重组hBMP一4成熟肤，复性后的 重组蛋白有良好的生物活性; 4、利用原核融合表达系统成功的表达了重组hBMP一4成熟肤，经切割去除 担体蛋白后具有良好的生物活性;