假白布勒弹孢酵母发酵生产辅酶Q10的研究

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辅酶Q10是人体血液中必需的一种物质,在人体细胞内与线粒体内膜结合,是呼吸链中重要的递氢体。辅酶Q10具有抗氧化、消除自由基、提高机体免疫力、抗衰老等功能,广泛应用于各类心脏病、糖尿病、癌症、急慢性肝炎、帕金森症等疾病的治疗。本文对假白布勒弹孢酵母(Bullera pseudoalba)发酵制备辅酶Q10的发酵条件及提取工艺进行了研究。以假白布勒弹孢酵母(Bullera pseudoalba)为出发菌株,经过紫外诱变得到一菌株,其辅酶Q10产量为2.219mg/L,单位菌体的辅酶Q10含量比原始菌株高87.7%,单位体积发酵液辅酶Q10产量为原菌株的1.16倍。对发酵培养基组成进行了优化,优化培养基组成为:葡萄糖1%、酵母粉0.5%、蛋白胨5%、K2HPO4 0.5%、KH2PO4 0.5%、MgSO4·7H2O 0.3%。并确定了最佳培养时间72h。本文还研究了葡萄糖流加操作对辅酶Q10的产量的影响,辅酶Q10产量达7.44mg/L。添加一系列有利于类胡萝卜素合成的物质(如豆油、胡萝卜汁、西红柿汁、桔子皮汁等)或抑制胡萝卜素的合成途径中从番茄红素合成胡萝卜素的的阻断剂:烟叶废弃物等,这些自然添加物的加入均能提高辅酶Q10的产量,说明辅酶Q10的合成和类胡萝卜素的合成之间关系密切。能促进(两者合成途径中共同部分)和阻碍(胡萝卜素单独的途径)胡萝卜素合成的物质,均能促进辅酶Q10的合成。研究了添加辅酶Q10前体物对羟基苯甲酸对酵母菌生物量和辅酶Q10的合成的影响,确定了对羟基苯甲酸的最佳添加方式:对羟基苯甲酸发酵初始浓度0.2%,发酵24h后每隔6小时添加浓度为0.1%的对羟基苯甲酸,共加入6次。比不加对羟基苯甲酸的对照组辅酶Q10产量提高了44%。另外,本文还探讨了同时添加对羟基苯甲酸和胡萝卜汁两种物质对辅酶Q10合成的影响。辅酶Q10的提取采用醇碱皂化法。醇碱皂化的最佳的反应条件为90℃,回流60min。确定了将萃取剂直接加入到醇碱回流液中,然后冷却分层的萃取步骤,与醇碱皂化反应结束后加入萃取剂萃取相比,萃取率提高70%。辅酶Q10具有光不稳定性,本实验研究了普通光照条件下辅酶Q10光分解反<WP=4>应,辅酶Q10分解物在HPLC中表现为三个峰值,其分解速率可用一级动力学表示,实验条件下辅酶Q10分解速率常数k为0.002h-1,半衰期t1/2为346h。
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