研究背景：
　　单纯疱疹病毒1型（HSV-1）是一种人类嗜神经病毒，人群感染率高，且易发生潜伏感染，在一定条件如紧张焦虑等刺激下，处于潜伏状态的病毒被激活引起复发感染，引起一系列严重症状。目前对原发性HSV-1感染和疾病再激活的治疗是非选择性的，主要是无环鸟苷等嘌呤核苷类及其类似物，如阿昔洛韦（Acyclovir）、泛昔洛韦（Valaciclovir）等，他们的作用靶点是病毒DNA聚合酶，抑制病毒的复制，对潜伏感染的病毒无效，并且具有很多不良副作用，而且随着抗疱疹病毒药物的广泛使用，关于耐药株的报道也越来越多。因此，开发新的抗病毒治疗策略以应对HSV急性感染和潜伏感染是抗病毒研究的重要方向。
　　目的：
　　设计miRNA序列，不仅靶向下调HSV-1复制过程中的关键蛋白ICP4的表达，并且该人工设计的miRNA序列还携带外泌体包装分泌的特殊序列，可以使miRNA天然包裹进入外泌体，使外泌体成为miRNA的天然载体。外泌体作为载体，包裹miRNA运输至受体细胞，并将有效的miRNA成分传递给受体细胞，起到明显的抗感染效果。本课题主要探讨外泌体包裹miRNA作为新的抗病毒治疗策略的可行性，研究其抑制病毒感染的效率。
　　方法：
　　1.设计miRNA序列靶向下调ICP4蛋白的表达，构建miR401表达载体。
　　2.构建筛选靶向沉默ICP4的miRNA稳定表达细胞系HEp-miR401。
　　3.用聚乙二醇沉淀的方法提取外泌体。
　　4.用qNano和Westernblot的方法验证提取的外泌体的特征。
　　5.用RealtimePCR方法检测miRNA稳定表达细胞系产生的外泌体中包裹的miR401的量。
　　6.用病毒滴定、Westernblot和RealtimePCR方法验证miRNA稳定表达细胞系产生的外泌体的抗病毒作用。
　　7.用CD9蛋白滴定HEp-miR401细胞系产生的外泌体中包裹miR401的量。
　　8.Westernblot和病毒滴定验证外泌体递呈miR401抑制HSV-1复制是剂量依赖性的。
　　结果：
　　1.成功构建miR401表达载体，靶向下调ICP4蛋白表达。
　　2.构建miR401表达的稳定细胞系HEp-miR401，该稳定表达的细胞系能够抑制HSV-1病毒复制。
　　3.HEp-miR401稳定细胞系及HEp-2细胞能够产生外泌体。
　　4.HEp-miR401稳定细胞系产生的外泌体能够将miR401包裹进入外泌体。
　　5.miR401表达的稳定细胞系HEp-miR401产生的外泌体介导miR401递送至受体细胞。
　　6.HEp-miR401稳定细胞系产生的外泌体中的有效成分miR401可以明显抑制HSV-1病毒复制，而且这种抗病毒效应是呈剂量依赖性的。
　　结论：
　　我们设计miR401靶向HSV-1复制的关键蛋白ICP4，沉默ICP4蛋白，且可以使我们设计的miRNA天然包裹进入外泌体，使外泌体成为miRNA的天然载体，发挥外泌体作为药物载体的各种优势，从而进行抗病毒治疗新方法研究。而且这一策略可以延申至抗肿瘤、治疗肝炎等领域。