【摘 要】
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研究背景和目的:肝细胞癌是一种典型的炎症相关性肿瘤,有研究发现,髓样细胞表达触发受体(TREM)参与免疫调控炎症反应,在炎症相关性肿瘤的发生机制中起作用。作为肿瘤微环境中
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研究背景和目的:肝细胞癌是一种典型的炎症相关性肿瘤,有研究发现,髓样细胞表达触发受体(TREM)参与免疫调控炎症反应,在炎症相关性肿瘤的发生机制中起作用。作为肿瘤微环境中主要的免疫细胞,肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)在肿瘤的血管形成、侵袭及转移等发面发挥了重要作用。本研究旨在通过检测肝癌组织TAMs及TREM的表达类型,测定TAMs表面TREM-1的表达,肝癌患者外周血中s TREM-1、sCD163及TNF-α等炎性因子的表达,阐明TREM-1对TAMs的调控及对肝癌的发生、发展的影响。同时,体外建立M2型巨噬细胞模型,为后续进一步验证TREM-1对巨噬细胞分化表型的影响奠定实验基础。研究方法:选取20例在本院确诊的需进行手术切除的未进行其他治疗的原发性肝癌患者为研究对象,ELISA法测定外周血中s TREM-1、sCD163、TNF-α、CRP及IL-6炎性因子的含量;分别取肝癌组织、癌旁组织,qRT-PCR检测TREM-1/TREM-2 mRNA表达水平;免疫组化染色技术检测TREM-1/TREM-2蛋白表达;免疫组化双染技术检测M1/M2型巨噬细胞的浸润水平及M2型巨噬细胞表面TREM-1的表达。体外分离培养人外周血单核细胞,流式细胞术测定细胞纯度;用M-CSF、IL-4和GM-CSF两种方法诱导培养M2型巨噬细胞;流式细胞术测M2细胞表型。分离培养小鼠骨髓间充质干细胞,用M-CSF诱导形成巨噬细胞,流式细胞术测定表型。结果:ELISA结果显示,sTREM-1、sCD163水平较肝硬化患者均明显增高(3.722±0.02419 vs 2.606±0.04036 ng/ml、2.093±0.2835 vs 0.9379±0.1326μg/ml,P<0.01),TNF-α、CRP及IL-6水平在肝癌与肝硬化患者之间均无明显差异(P>0.05);肝癌组织中TREM-1的mRNA水平(0.2696±0.03860)明显高于癌旁组织(0.1278±0.01994,P<0.01),而TREM-2的mRNA水平与癌旁相比无明显差异(P>0.05);免疫组化染色显示癌组织中的TREM-1阳性表达率(11.23±0.8840%)明显高于癌旁组织(2.253±0.8662%,P<0.01);肝癌组织中的M2型细胞阳性率(3.500±0.5000个/HP)显著高于癌旁组织(0.5100±0.1813个/HP,P<0.01),而M1型细胞未见表达;免疫组化双染结果显示,相对于癌旁组织,肝癌组织中的M2型巨噬细胞表面高表达TREM-1(16.51±0.9327%vs 6.644±1.221%,P<0.01)。体外提取的单核细胞CD14阳性率达83.3%,与未诱导的单核细胞相比,M-CSF及IL-4诱导组巨噬细胞CD206表达阳性率显著增高(63.57±0.1202%vs0.7000±0.05774%,P<0.01),GM-CSF诱导组巨噬细胞CD206表达阳性率显著增高(92.87±0.2906%vs0.7000±0.05774%,P<0.01),与诱导前骨髓间充质干细胞相比,M-CSF诱导的小鼠骨髓间充质干细胞F4/80及CD11b的表达阳性率明显升高(70.07±0.1764%vs 1.533±0.1202%,P<0.01)。结论:1)肝癌组织中浸润的TAM表型以M2型为主,TREM的表达以TREM-1为主,且肝癌组织中M2型巨噬细胞表面高表达TREM-1。2)体外成功诱导并建立了M2型巨噬细胞模型。
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