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本研究主要目的是探讨复合菌剂发酵全价日粮对獭兔促生长作用,并对其机理进行初步探究,以期为其促生长提供理论依据,同时为益生菌剂的应用开发奠定科学基础。以本实验室提供的复合益生菌剂(主要功能是产生消化酶与益生物质、同时可拮抗常见肠道病原菌)为试验材料,对兔全价日粮进行发酵,选取7周龄、体重(1463.54±185.51)g獭兔24只,将其随机分成对照组(饲喂基础日粮)和试验组(饲喂全价发酵日粮),每组12个重复。预试期3d,正式试验期18d。本研究主要分为以下三部分:
1.利用复合益生菌剂发酵全价日粮,并对菌剂发酵前后兔日粮的营养品质进行评定。结果表明,复合菌剂发酵作用可显著提升日粮品质:发酵前后日粮中的含菌量由4.36×106CFU/g提高到了1.04×109CFU/g;其纤维类物质含量均有不同程度的降低,其中酸性洗涤纤维、中性洗涤纤维、粗纤维含量分别下降了30.34%、42.86%、23.91%,差异显著(P<0.05);且粗蛋白、粗脂肪、淀粉含量呈现小幅度增加;乙酸、丙酸、乳酸含量分别由0增加至0.92%、2.67%、4.16%,差异显著(P<0.05);且发酵日粮具有明显酸香味。
2.利用发酵日粮对獭兔进行饲喂试验,比较发酵日粮对其生长性能的影响。结果表明,与对照组相比,试验组供试兔平均日增重提高了11.73%(P<0.05),日采食量提高了2.31%(P<0.05),料重比降低了9.32%(P<0.05);且发酵日粮使试兔的腹泻率由2.16%下降至0.23%,死亡率由8.33%下降至0。
3.从血液指标、免疫器官指数、肠道形态结构、表观消化率、消化酶活力及基因表达变化及试兔肠道菌群多样性等几方面探讨发酵日粮对供试兔的促生长机理。
结果表明,①发酵日粮可改善试兔血液生化指标:试验组供试兔血清中高密度脂蛋白(HDL-C)含量高于对照组,而甘油三酯(TG)和尿素氮(BUM)均呈下降趋势,门冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)含量无变化,差异不显著(P>0.05)。②发酵日粮可促进试兔免疫器官发育:试验组供试兔免疫器官指数高于对照组,肝、胆、肾、胸腺、脾指数分别提高了6.88%、16.27%、20.19%、30.85%(P<0.05)、35.69%。③发酵日粮对试兔肠道形态结构无显著影响:试验组回肠和盲肠绒毛长度与对照组无显著差异。④发酵日粮可提高试兔对营养物质的表观消化率:与对照组相比,粗脂肪、粗蛋白、淀粉、粗纤维分别提高了4.78%、3.07%、2.32%(P<0.05)、10.67%(P<0.05)。⑤发酵日粮可增加兔肠道消化酶活力,且试兔对益生菌的采食促使纤维素酶基因在空肠和回肠中的表达量增加,但使胰腺消化酶基因的表达下降:发酵日粮使试兔肠道中的脂肪酶、蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶活力分别提高了14.07%、8.21%、0.54%、27.25%(P<0.05)。RT-PCR技术探明,发酵日粮使供试兔胰腺消化酶基因的表达量下降;但在空肠和回肠中,纤维素酶基因表达量呈现上调趋势,分别增加了35.66%、74.11%,差异极显著(P<0.01)。⑥发酵日粮可调节试兔肠道菌群结构:为探究发酵日粮对试兔肠道菌群多样性的影响,本研究采用高通量测序技术对肠道菌群16SrDNA高变区进行测序,对获得的原始数据进行数据过滤及Tags拼接、OTU聚类分析、Alpha多样性分析。结果表明,试兔盲肠中微生物丰度最高,物种分布最均匀;小肠中的优势菌群为厚壁菌门、变形菌门、放线菌门和拟杆菌门,而盲肠中含量较多的菌群为厚壁菌门、变形菌门、拟杆菌门和疣微菌门;发酵日粮增加了试兔肠道内的厚壁菌门(Firmicutes)数量,降低了拟杆菌门(Bacteroidetes)和变形菌门(Proteobacteria)丰度;根据Alpha多样性指标测定结果显示,发酵日粮增加了供试兔回肠和盲肠中的细菌丰度。此外,经活菌计数发现发酵日粮可提高试验组供试兔肠道中的乳酸杆菌、双歧杆菌、芽孢杆菌数量(P<0.05),降低大肠杆菌数量。
结论:复合益生菌剂发酵作用可改善全价兔日粮品质,提高獭兔生长性能,降低其腹泻率与死亡率,改善血液生化指标,促进免疫器官发育。发酵日粮促进试兔生长的机理除日粮利用率提高外,还在于发酵日粮中富含大量的功能菌株,它们随采食进入动物体内可调节机体肠道菌群结构,提高消化酶活力,从而提高试兔免疫器官指数,增强机体免疫力,促使试兔健康生长。
1.利用复合益生菌剂发酵全价日粮,并对菌剂发酵前后兔日粮的营养品质进行评定。结果表明,复合菌剂发酵作用可显著提升日粮品质:发酵前后日粮中的含菌量由4.36×106CFU/g提高到了1.04×109CFU/g;其纤维类物质含量均有不同程度的降低,其中酸性洗涤纤维、中性洗涤纤维、粗纤维含量分别下降了30.34%、42.86%、23.91%,差异显著(P<0.05);且粗蛋白、粗脂肪、淀粉含量呈现小幅度增加;乙酸、丙酸、乳酸含量分别由0增加至0.92%、2.67%、4.16%,差异显著(P<0.05);且发酵日粮具有明显酸香味。
2.利用发酵日粮对獭兔进行饲喂试验,比较发酵日粮对其生长性能的影响。结果表明,与对照组相比,试验组供试兔平均日增重提高了11.73%(P<0.05),日采食量提高了2.31%(P<0.05),料重比降低了9.32%(P<0.05);且发酵日粮使试兔的腹泻率由2.16%下降至0.23%,死亡率由8.33%下降至0。
3.从血液指标、免疫器官指数、肠道形态结构、表观消化率、消化酶活力及基因表达变化及试兔肠道菌群多样性等几方面探讨发酵日粮对供试兔的促生长机理。
结果表明,①发酵日粮可改善试兔血液生化指标:试验组供试兔血清中高密度脂蛋白(HDL-C)含量高于对照组,而甘油三酯(TG)和尿素氮(BUM)均呈下降趋势,门冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)含量无变化,差异不显著(P>0.05)。②发酵日粮可促进试兔免疫器官发育:试验组供试兔免疫器官指数高于对照组,肝、胆、肾、胸腺、脾指数分别提高了6.88%、16.27%、20.19%、30.85%(P<0.05)、35.69%。③发酵日粮对试兔肠道形态结构无显著影响:试验组回肠和盲肠绒毛长度与对照组无显著差异。④发酵日粮可提高试兔对营养物质的表观消化率:与对照组相比,粗脂肪、粗蛋白、淀粉、粗纤维分别提高了4.78%、3.07%、2.32%(P<0.05)、10.67%(P<0.05)。⑤发酵日粮可增加兔肠道消化酶活力,且试兔对益生菌的采食促使纤维素酶基因在空肠和回肠中的表达量增加,但使胰腺消化酶基因的表达下降:发酵日粮使试兔肠道中的脂肪酶、蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶活力分别提高了14.07%、8.21%、0.54%、27.25%(P<0.05)。RT-PCR技术探明,发酵日粮使供试兔胰腺消化酶基因的表达量下降;但在空肠和回肠中,纤维素酶基因表达量呈现上调趋势,分别增加了35.66%、74.11%,差异极显著(P<0.01)。⑥发酵日粮可调节试兔肠道菌群结构:为探究发酵日粮对试兔肠道菌群多样性的影响,本研究采用高通量测序技术对肠道菌群16SrDNA高变区进行测序,对获得的原始数据进行数据过滤及Tags拼接、OTU聚类分析、Alpha多样性分析。结果表明,试兔盲肠中微生物丰度最高,物种分布最均匀;小肠中的优势菌群为厚壁菌门、变形菌门、放线菌门和拟杆菌门,而盲肠中含量较多的菌群为厚壁菌门、变形菌门、拟杆菌门和疣微菌门;发酵日粮增加了试兔肠道内的厚壁菌门(Firmicutes)数量,降低了拟杆菌门(Bacteroidetes)和变形菌门(Proteobacteria)丰度;根据Alpha多样性指标测定结果显示,发酵日粮增加了供试兔回肠和盲肠中的细菌丰度。此外,经活菌计数发现发酵日粮可提高试验组供试兔肠道中的乳酸杆菌、双歧杆菌、芽孢杆菌数量(P<0.05),降低大肠杆菌数量。
结论:复合益生菌剂发酵作用可改善全价兔日粮品质,提高獭兔生长性能,降低其腹泻率与死亡率,改善血液生化指标,促进免疫器官发育。发酵日粮促进试兔生长的机理除日粮利用率提高外,还在于发酵日粮中富含大量的功能菌株,它们随采食进入动物体内可调节机体肠道菌群结构,提高消化酶活力,从而提高试兔免疫器官指数,增强机体免疫力,促使试兔健康生长。