新疆荒漠盐碱土中抗动物病原菌的放线菌资源研究

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本研究以分离自新疆地区盐碱土中的412株放线菌作为供试放线菌,以养殖业中危害比较严重的12种动物肠道病原菌作为靶标菌进行研究。对新疆放线菌的抗菌谱规律、优良放线菌菌株的分类地位、发酵液的性质及活性物质的提取和发酵条件、进行了较为系统的研究,得出以下主要研究结果:(1)通过琼脂块法对新疆放线菌进行拮抗性初筛,试验发现新疆地区荒漠土中39.6%的放线菌对所选的8种病原菌有拮抗作用,且供试菌对革兰氏阳性菌的拮抗效果优于革兰氏阴性菌,对牛无乳链球菌Ⅰ、Ⅱ和猪金黄色葡萄球菌Ⅰ、Ⅱ的平均抑制比例为26.0%和22.3%。对抑菌圈直径D≥15.0mm的菌株进行滤纸片复筛,选用12种病原菌作为靶标菌,发现发酵液活性与皿内试验结果基本一致,菌株XJ1625菌株和XJ68H02病原菌的抑菌活性普遍较高,对金黄色葡萄球菌和牛无乳链球菌的抑菌圈直径均在30.0mm左右。(2)通过初筛和复筛得到11株抑菌效果较好的拮抗性放线菌,经多相分类鉴定确定了10株为链霉菌属的不同种,具体分类地位如下:XJ6-2菌株为天蓝褐链霉菌(Streptomyces coeruleofuscus);XJ1-5-10菌株为粪生链霉菌(Streptomyces fimicarius);XJ2-9菌株为灰平链霉菌(Streptomyces griseoplanus);XJ2-5-1菌株为弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae);XJ19-11菌株为变异链霉菌(Streptomyces variabilis);XJ1202菌株为苍黄链霉菌(Streptomyces luridus);XJ1625菌株为微黄绿链霉菌(Streptomycesflavidovirens);XJ2-9-7菌株为库尔萨诺夫链霉菌(Streptomyces kurssanovii);XJ68H02为铁钻土链霉菌(Streptomyces ferralitis);XJ617菌株为堆孢链霉菌(Streptomycesmassasporeus),而XJ1-6-5菌株序列相似度在98%以下,可能为链霉菌属的新种,需要进一步的鉴定。(3)采用琼脂平板打孔法对抑菌效果较好的菌株XJ1625和XJ68H02进行发酵液性质测定,以鸡金黄色葡萄球菌CVCC548为靶标菌,发现两菌株对酸碱、温度、紫外线和蛋白酶K条件下都有较好的稳定性,但菌株XJ68H02的对酸碱有较大的适应范围,长时间贮藏时能保持较高的抑菌活性。另外菌株XJ1625和XJ68H02发酵液活性物质均可被不同极性的有机溶剂萃取,但菌株XJ68H02能被乙醇提取到更高的抑菌物质,且有较高的发酵液效价和较小的MIC,因此菌株XJ68H02更有利于进一步的研究。(4)通过正交试验对菌株XJ68H02液体发酵进行条件优化,以鸡金黄色葡萄球菌CVCC548为靶标菌,琼脂平板打孔法测定抑菌活性。得到该菌株最佳的发酵条件:以黄豆粉浸汁为培养基,在种龄36h时以7.0%接种量接种,初始pH设为7.5,发酵温度为35℃,培养时间为132h后可得到活性最高的发酵液,发酵液效价为933.77μg/mL,比优化前提高了2.8倍。
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