【摘 要】
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MicroRNAs是一类长度约为23个核苷酸的非编码RNA,广泛分布于病毒、植物、原生生物和动物中,其功能是介导转录后基因沉默。MicroRNAs构成复杂的调控网络,通过与靶基因mRNA3’UTR区互补配对引起靶基因降解或翻译抑制,以此调节涉及不同生物和生理过程的无数基因的表达,包括脂肪细胞的分化,越来越多研究证实MicroRNA对脂肪细胞分化的调控具有重要作用。因此本试验根据课题组前期在延边黄牛
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MicroRNAs是一类长度约为23个核苷酸的非编码RNA,广泛分布于病毒、植物、原生生物和动物中,其功能是介导转录后基因沉默。MicroRNAs构成复杂的调控网络,通过与靶基因mRNA3’UTR区互补配对引起靶基因降解或翻译抑制,以此调节涉及不同生物和生理过程的无数基因的表达,包括脂肪细胞的分化,越来越多研究证实MicroRNA对脂肪细胞分化的调控具有重要作用。因此本试验根据课题组前期在延边黄牛公牛和阉牛背最长肌组织筛选出的差异表达的miR-365-3p及其靶基因FKBP5进行研究,通过细胞实验和实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹等多种方法探讨了 miR-365-3p与FKBP5对延边黄牛脂肪细胞分化的作用机制,旨在为延边黄牛的分子育种工作提供理论基础与依据。所得结果如下:1.bta-miR-365-3p的过表达使脂肪细胞中的脂质累积与甘油三酯含量显著下降（p＜0.05）,调控脂肪细胞分化关键因子C/EBPα和PPARγ的表达量也显著降低（p＜0.05）,而抑制bta-miR-365-3p的表达实验结果则与上述相反,说明bta-miR-365-3p可能抑制延边黄牛前体脂肪细胞的成脂分化。2.FKBP5基因的过表达使成脂关键基因C/EBPα与PPARγ的表达显著上调（p＜0.05）,而抑制FKBP5则使C/EBPα与PPAR γ表达显著下降（p＜0.05）,说明FKBP5基因可对延边黄牛前体脂肪细胞的成脂分化有促进作用。3.在双荧光素酶报告检测实验中,共转染bta-miR-365-3p mimics与Psicheck2-FKBP5-WT的实验组其荧光活性显著下降（p＜0.05）,说明bta-miR-365-3p与FKBP5存在靶向关系,而过表达bta-miR-365-3p使FKBP5表达量显著下调（p＜0.05）,抑制bta-miR-365-3p结果则相反,说明bta-miR-365-3p负向调控FKBP5。4.bta-miR-365-3p 的过表达显著抑制 AMPK α、mTOR、SREBP1 基因mRNA与蛋白表达（p＜0.05）,抑制bta-miR-365-3p表达则与上述实验结果相反。FKBP5的过表达显著上调AMPKα、mTOR、SREBP1基因表达（p＜0.05）,抑制FKBP5的表达则与上述实验结果相反。而bta-miR-365-3p对FKBP5有负向调控作用,说明bta-miR-365-3p可能通过靶向FKBP5基因参与AMPK/mTOR信号通路调控延边黄牛前体脂肪细胞分化。
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