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天然药物是药物的一个重要组成成分,天然药物的来源包括植物、动物、矿物和微生物,并以植物为主,种类繁多。我国天然药物资源蕴藏丰富,中药资源已达12772种,其中有大量中药资源有待开发利用。国内外有关华蟹甲的化学成分及药理活性的研究报道较少,因此对华蟹甲的化学成分进行了系统的研究,并对其生物活性进行了初步的研究,为华蟹甲的进一步研究提供科学依据。华蟹甲(Sinacalia tangutica(Maxim.)B.Nord.)隶属菊科华蟹甲属。本属为中国特有属,共有4种,广泛分布于我国西北和西南地区的甘肃、青海、宁夏、山西、陕西、湖南、四川等省。其他三种分别为革叶华蟹甲(Sinacalia caroli(C.Winkl.)C.Jeffrey et Y.L Chen),双花华蟹甲(Sinacalia davidii(Franch.)Koyama),大头华蟹甲(Sinacalia macrocephala(H.Robins.Et Brettel)C.Jeffrey et Y.L.Chen)。据报道该属部分植物在民间药用,主治风湿疼痛、头痛眩晕、胸腔胀满、咳嗽痰多、偏瘫等疑难杂症。文献报道从华蟹甲地上部分分到的化合物类型主要包括倍半萜,三萜,甾体,香豆素,黄酮类化合物;从华蟹甲地下部分分到的化合物类型主要包括香豆素和黄酮类化合物。生物活性研究表明华蟹甲具有抗肿瘤,抗菌,杀虫等活性。本论文对华蟹甲(Sinacalia tangutica(Maxim.)B.Nord.)干燥的地下部分的化学成分进行了系统研究。主要对华蟹甲乙酸乙酯萃取部分,正丁醇萃取部分等极性较大的部分进行了化学成分研究:共分离鉴定了26个化合物,包括1个新的酚苷类化合物,19个首次从该属植物中分到的化合物。在该属植物中首次发现绿原酸类化合物的存在,并对其α-葡萄糖苷酶抑制活性进行了评价,绿原酸类化合物展现了很强的α-葡萄糖苷酶抑制活性。华蟹甲干燥根茎共10.85 kg,用95%乙醇冷浸2周,得到冷浸液30 L。减压浓缩,回收乙醇溶剂。将浸泡充分的华蟹甲根茎用95%乙醇溶液加热回流提取2次,60%乙醇溶液加热回流提取2次,合并提取液,减压浓缩,回收乙醇溶剂,得到浸膏2.44 kg。将浸膏用2 L蒸馏水混悬,然后依次用等体积石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,得石油醚萃取部分(STP)、二氯甲烷萃取部分(STC)、乙酸乙酯萃取部分(STE)、正丁醇萃取部分(STB)。其中正丁醇萃取部分(STB)进一步通过D101大孔吸附树脂分离,分别用水、30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇溶液依次洗脱,得到正丁醇萃取部分的水洗脱部分(STBH)、正丁醇萃取部分的30%乙醇洗脱部分(STB 30)、正丁醇萃取部分的70%乙醇洗脱部分(STB 70)、正丁醇萃取部分的95%乙醇洗脱部分(STB 95)。STP萃取部分通过各种柱色谱分离纯化,并综合运用多种波谱技术以及与标准品比对的方法,鉴定了5个化合物,分别为:STP-1(bauerenol鲍尔烯醇)、STP-2(β-sitosterol谷甾醇)、STP-4(petasin蜂斗菜素)、STP-5(isopetasin异蜂斗菜素)、STP-6(hydrangetin 7-羟基-8-甲氧基香豆素)。STC萃取部分通过各种柱色谱分离纯化,并综合运用多种波谱技术以及与标准品比对的方法,鉴定了6个化合物,分别为:STC-1(4-hydroxybenzaldehyde对羟基苯甲醛)、STC-3(p-hydroxycinnamic acid对羟基桂皮酸)、STC-4(ferulic acid阿魏酸)、STC-5(4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzaldehyde 4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲醛)、STC-6(7-hydroxy-coumarin 7-羟基香豆素)、STC-7(syringic acid4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲酸)。STE萃取部分通过各种柱色谱分离纯化,并综合运用多种波谱技术,鉴定了8个化合物,分别为:STE-1(the mixture ofβ-sitosterol and stigmasterol谷甾醇和豆甾醇混合物)、STE-3(caffeic acid咖啡酸)、STE-5(3,4-dihydroxybenzaldehyde3,4-二羟基苯甲醛)、STE-6(methyl 4,5-di-O-caffeoyl quinate 4,5-二咖啡酰基奎宁酸甲酯)、STE-7(methyl-3,5-di-O-caffeoyl quinate 3,5-二咖啡酰基奎宁酸甲酯)、STE-8(methyl 5-O-caffeoyl quinate 5-咖啡酰基奎宁酸甲酯)、STE-9(ethyl5-O-caffeoyl quinate 5-咖啡酰基奎宁酸乙酯)、STE-11(methyl 4-O-caffeoyl quinate4-咖啡酰基奎宁酸甲酯)。STB 30部分通过各种柱色谱分离纯化,并综合运用多种波谱技术,鉴定了6个化合物,分别为:STB 30-1(n-butyl-β-D-fructopyranoside正丁基-β-D-吡喃果糖苷)、STB 30-2(daphnin methylether 8-甲氧基-7-O-β-D-葡萄糖香豆素)、STB30-3(7-hydroxycoumarin-8-O-β-D-glucopyranoside 7-羟基-8-O-β-D-葡萄糖香豆素)、STB 30-4(trans-ferulic acid 4-O-β-D-glucopyranoside 4-O-β-D-葡萄糖阿魏酸)、STB 30-6(3-(4-O-β-D-glucopyranosyloxy-3,5-dimethoxy)-phenyl-2E-propenol 3,5-二甲氧基-4-O-β-D-葡萄糖苯丙烯醇)、STB 30-10(5-hydroxyeugenol-4-O-β-Dxylopyranosyl-(1→6)-O-β-D-glucopyranoside 5-羟基-4-O-β-D-木糖-(1→6)-β-D-葡萄糖丁香油酚)。STB 70部分通过各种柱色谱分离纯化,共得到2个化合物。鉴定了其中1个化合物的结构,为:STB 70-2(n-butyl-caffeic acid咖啡酰基正丁酯)。综合上述,本论文通过对华蟹甲的干燥根茎乙醇提取物的各个萃取部分通过正相和反相硅胶柱色谱法、聚酰胺柱色谱法、葡聚糖凝胶柱色谱法、ODS柱色谱法、制备高效液相柱色谱法以及重结晶等方法,共得到29个化合物,并综合运用一维及二维核磁共振谱、红外分光光度法、紫外分光光度法、高分辨质谱分析等波谱技术以及与标准品比对的方法,鉴定了其中26个化合物的结构,分别为:20个酚类化合物(STP-6、STC-1、STC-3、STC-4、STC-5、STC-6、STC-7、STE-3、STE-5、STE-6、STE-7、STE-8、STE-9、STE-11、STB 30-2、STB 30-3、STB 30-4、STB 30-6、STB 30-10、STB 70-2);1个正丁基-β-D-吡喃果糖苷(STB 30-1);3个萜类(STP-1、STP-4、STP-5);2个甾体(STP-2、STE-1)。以上化合物中,1个为新化合物:5-羟基-4-O-β-D-木糖-(1→6)-O-β-D-葡萄糖丁香油酚(STB 30-1),19个为首次在华蟹甲属植物中发现的化合物:鲍尔烯醇(STP-1)、蜂斗菜素(STP-4)、对羟基桂皮酸(STC-3)、阿魏酸(STC-4)、4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲醛(STC-5)、4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲酸(STC-7)、咖啡酸(STE-3)、3,4-二羟基苯甲醛(STE-5)、4,5-二咖啡酰基奎宁酸甲酯(STE-6)、3,5-二咖啡酰基奎宁酸甲酯(STE-7)、5-咖啡酰基奎宁酸甲酯(STE-8)、5-咖啡酰基奎宁酸乙酯(STE-9)、4-咖啡酰基奎宁酸甲酯(STE-11)、正丁基-β-D-吡喃果糖苷(STB 30-1)、8-甲氧基-7-O-β-D-葡萄糖香豆素(STB 30-2)、7-羟基-8-O-β-D-葡萄糖香豆素(STB 30-3)、4-O-β-D-葡萄糖阿魏酸(STB 30-4)、3,5-二甲氧基-4-O-β-D-葡萄糖苯丙烯醇(STB 30-6)和咖啡酰基正丁酯(STB70-2)。本论文采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法对华蟹甲干燥根茎乙醇提取物的不同萃取部分的抗氧化能力进行了评价,华蟹甲干燥根茎乙醇提取物的不同萃取部分均有一定抗氧化能力,其中二氯甲烷萃取部分(STC),乙酸乙酯萃取部分(STE),正丁醇萃取部分的30%乙醇洗脱部分(STB 30),正丁醇萃取部分的70%乙醇洗脱部分(STB 70)抗氧化能力较好。这与在华蟹甲干燥根茎乙醇提取物的STC萃取部分,STE萃取部分,STB 30部分,STB 70部分分到大量酚类化合物相对应。本论文采用4-硝基苯基-α-吡喃葡萄糖苷(PNPG)法对华蟹甲干燥根茎乙醇提取物的不同萃取部分的α-葡萄糖苷酶抑制活性进行了评价,华蟹甲干燥根茎乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分的α-葡萄糖苷酶抑制活性较强。在乙酸乙酯萃取部分主要分到绿原酸类化合物,本论文又对乙酸乙酯萃取部分分离得到的绿原酸类化合物进行了α-葡萄糖苷酶抑制活性实验,从乙酸乙酯萃取部分分离得到的绿原酸类化合物均有一定α-葡萄糖苷酶抑制活性。本论文的研究结果不仅为明确华蟹甲的药效物质基础提供了理论基础,也为其在抗氧化和抗Ⅱ型糖尿病应用方面的进一步研究开发提供了科学依据。