【摘 要】
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铁是人体中必不可少的微量元素,它是血红蛋白和肌红蛋白,以及某些酶(如过氧化物酶)的组成部分。铁离子可与多糖,蛋白等结合,成为有机铁。相对传统补铁剂而言,有机铁更易于被人体吸收利用,且不良反应较少。其中,多糖常用来制备多糖铁配合物,制备方法常采用化学合成法,本文通过生物转化的方式对蛹虫草菌丝体进行富铁培养,得到了蛹虫草多糖铁。首先利用液体发酵的方法对蛹虫草菌丝体进行铁离子的富集,以生物量和铁含量为指
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铁是人体中必不可少的微量元素,它是血红蛋白和肌红蛋白,以及某些酶(如过氧化物酶)的组成部分。铁离子可与多糖,蛋白等结合,成为有机铁。相对传统补铁剂而言,有机铁更易于被人体吸收利用,且不良反应较少。其中,多糖常用来制备多糖铁配合物,制备方法常采用化学合成法,本文通过生物转化的方式对蛹虫草菌丝体进行富铁培养,得到了蛹虫草多糖铁。首先利用液体发酵的方法对蛹虫草菌丝体进行铁离子的富集,以生物量和铁含量为指标对蛹虫草的培养条件进行优化。结果表明生物转化蛹虫草多糖铁的最佳培养条件为:葡萄糖4%,牛肉膏1%,磷酸二氢钾0.05%,硫酸镁0.05%,碳酸钙0.05%配成发酵液,添加过膜后的0.4 g/L的Fe SO4溶液。在摇床培养5天,140r/min,25℃恒温培养。富铁菌丝体的铁含量为10.02mg/g。未富铁的菌丝体铁含量为38.16μg/g,可见富铁后,菌丝体中的铁含量增加,得到了富铁蛹虫草菌丝体。然后分别收集富铁菌丝体及未富铁菌丝体,烘干后水提醇沉得到多糖铁溶液及未富铁多糖溶液,进行除蛋白,除色素,透析等后,过Sephadex G-150凝胶层析柱进行分离纯化,通过原子荧光法测得纯多糖铁中铁含量为29.32 mg/g。之后对两种多糖进行结构表征。离子色谱结果表明多糖铁中葡糖糖含量相对未富铁组明显降低。核磁分析及红外光谱结果表明:相对未富铁组而言,多糖铁的β-Fe OOH键的结合位点在C-6位。甲基化表明:多糖铁的主链为→2)-β-D-Glcp-(1→,以→2,4)-α-D-Glcp-(1→高度分支,未富铁多糖的主链为→3)-β-D-Glcp-(1→,说明富铁对多糖的结构发生了改变。刚果红和圆二色谱结果表明:多糖铁及未富铁多糖均具有三螺旋结构,但多糖铁会在碱性条件下引起刚果红溶液的絮凝现象。扫描电镜及原子力显微镜表明:富铁对多糖的表面形态发生了变化。最后进行抗氧化试验,发现多糖铁对ABTS+自由基的清除率最大,达到了99.73%,与Vc持平。在浓度为0.5 mg/m L时,多糖铁对DPPH自由基的清除能力比未富铁多糖高10%左右。综上所述,在适宜的浓度下多糖铁比未富铁多糖有着更高的体外抗氧化活性。蛹虫草生物转化多糖铁为铁配合物的制备提供了新的思路。
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