日本血吸虫相关基因表达及重组产物应用于血吸虫病诊断的研究

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血吸虫病(Schistosomiasis)人兽共患,危害严重,动物是血吸虫病的主要传染源。目前我国血吸虫病防治的难点是中间宿主钉螺难以消灭、重复感染严重,结合化疗措施不能阻断血吸虫病传播,迫切需要加强血吸虫病免疫预防研究,建立更为特异、敏感的家畜血吸虫病诊断检测技术。本研究针对在中国流行的中国大陆株日本血吸虫,开展23kD抗原基因的克隆及在真核表达系统昆虫细胞表达系统表达、评估重组23kD抗原作为诊断抗原在诊断血吸虫的临床感染情况中的作用;血吸虫虫卵是血吸虫致病和血吸虫病传播的主要因素,为此,本实验同时开展了组织蛋白酶L——与血吸虫产卵有关的诊断研究,以期为我国血吸虫病防治提供新的思路和新技术。 应用双酶切技术将编码日本血吸虫23kD膜蛋白的基因从pET-28c(+)中亚克隆至转移载体pBacPAK-His-1中,大量抽提质粒DNA;同时纯化家蚕杆状病毒(BmNPV)的DNA,用限制性内切酶Bsu-1酶切成线性,与质粒DNA共转染家蚕细胞,经3轮纯化得到重组病毒;SDS-PAGE显示重组蛋白的分子量为26kD;Western-blot显示重组Sj23能被人工血吸虫感染的兔血清识别。用108份血吸虫感染牛血清所进行的预实验显示,其阳性率达到78%。实验结果说明重组Sj23作为诊断抗原具有发展潜力。 将重组质粒pET-28a(+)-SjCL转化入大肠杆菌BL21中经小提质粒酶切鉴定、PCR鉴定为阳性转化子后,进行时项表达,SDS-PAGE显示,经IPTG诱导后8小时表达量最高。用镍离子亲和层析柱纯化表达产物,浓度为0.95mg/mL。用间接ELISA法检测血吸虫感染牛血清,阳性率达67.31%。实验结果说明重组SjCL作为诊断抗原有一定的应用前景。
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