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目的1.采用血清代谢组学与海马蛋白组学,筛选围绝经期肝郁证的血清生物学标记物,分析围绝经期肝郁证的关键调控信号通路,检测生物节律基因的表达变化,探究围绝经期肝郁证的生物学基础。2.从方证对应角度,采用柴胡疏肝散干预,验证围绝经期肝郁证生物节律紊乱的作用机制。方法1.50只8周龄SD雌性大鼠,随机分假手术组20只和造模组30只,造模组进行双侧卵巢摘除手术建立围绝经期模型,再随机分为围绝组10只、围绝肝郁组10只、柴胡疏肝散组10只。假手术组只摘除卵巢旁脂肪组织,再随机分为正常组10只和肝郁组10只。肝郁组、围绝肝郁组以及柴胡疏肝散组采用慢性温和不可预知性刺激（CUMS）方式建立肝郁证模型。柴胡疏肝散组灌胃21天,灌胃剂量约为3 g/kg/d,其余各组灌胃等体积0.9%氯化钠溶液。2.阴道脱落细胞涂片和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测大鼠血清中雌二醇（Estradiol,E2）、促卵泡雌激素（Follicle-stimulating Hormone,FSH）、促黄体生成素（Luteinizing Hormone,LH）含量验证围绝经期模型,行为学实验和体质量变化验证肝郁证模型。3.代谢组学检测大鼠血清42种神经递质含量。4.蛋白质组检测大鼠海马蛋白水平差异,生物信息学分析差异信号通路。5.q-PCR测定大鼠海马CLOCK、BMAL1、PER1、PER2 m RNA表达。6.Western blot测定大鼠海马CLOCK、BMAL1、PER1、PER2蛋白水平。结果1.光镜下观察,摘除卵巢后的大鼠阴道脱落细胞以大量白细胞为主。2.行为学实验:与正常组比,肝郁组和围绝肝郁组的移动总距离、中心区域停留时间、垂直次数和蔗糖水消耗率减少（P＜0.05,P＜0.01）,肝郁组游泳不动时长增加（P＜0.05）。与围绝肝郁组比,围绝组和柴胡疏肝散组垂直次数增加（P＜0.05,P＜0.01）,柴胡疏肝散组蔗糖水消耗率显著增加（P＜0.01）。体质量:与正常组比,肝郁组和围绝肝郁组的体质量和体质量增长率显著下降（P＜0.01）。与与围绝肝郁组比,围绝组和柴胡疏肝散组的体质量和体质量增长率显著升高（P＜0.01）。血清E2、FSH和LH含量:与正常组比,围绝组和围绝肝郁组E2、FSH和LH含量显著下降（P＜0.01）,肝郁组FSH和LH含量显著下降。与围绝肝郁组比,柴胡疏肝散组FSH含量增加（P＜0.05）。3.神经递质含量:与正常组比,肝郁组5-羟基吲哚乙酸、高香草酸、精胺含量下降（P＜0.05）,5-羟色胺、乙酰胆碱含量增多（P＜0.05）,围绝肝郁组乙酰胆碱、褪黑素含量增多（P＜0.05）,高香草酸、精胺含量下降（P＜0.05）。与围绝肝郁组比,围绝组5-羟基吲哚乙酸、谷氨酰胺含量增多（P＜0.05）,肝郁组5-羟色胺含量增多（P＜0.05）,乙酰胆碱、褪黑素含量显著下降（P＜0.01）,柴胡疏肝散组5-羟基吲哚乙酸、谷氨酰胺、高香草酸含量增多（P＜0.05）,乙酰胆碱、褪黑素含量下降（P＜0.05）。4.蛋白质组定量:差异蛋白质GO功能富集分析中,与神经内分泌的相关功能在2个比较组中显著富集。差异蛋白质KEGG通路富集分析,与神经内分泌的相关信号通路在2个比较组中显著富集,且在富集通路归属分类分析中,神经系统在围绝组比正常组中占比较大。对正常组、围绝肝郁组、柴胡疏肝散组的差异表达蛋白质进行Venn分析,发现Slc5a7蛋白,对这10个相同的差异表达蛋白质进一步进行KEGG通路富集分析,也富集到Cholinergic synapse通路。5.海马CLOCK、BMAL1、PER1和PER2的m RNA表达:与正常组比,肝郁组和围绝肝郁组CLOCK、BMAL1、PER1、PER2表达量均下降（P＜0.05,P＜0.01）。与围绝肝郁组比较,柴胡疏肝散组CLOCK、BMAL1表达量均上升（P＜0.05）。6.海马CLOCK、BMAL1、PER1和PER2的蛋白水平:与正常组比较,肝郁组和围绝肝郁组CLOCK、PER1、PER2和BMAL1表达量均显著下降（P＜0.01）。与围绝肝郁组比较,围绝组的CLOCK、BMAL1、PER1和PER2表达量均显著上升（P＜0.01）,柴胡疏肝散组的CLOCK、PER1表达量均上升（P＜0.05）。结论1.围绝经期肝郁证大鼠神经内分泌功能异常和CLOCK、BMAL1、PER1、PER2表达异常导致大鼠生物节律紊乱。2.柴胡疏肝散能调节神经内分泌和生物节律基因的表达来改善生物节律紊乱,从而改善大鼠围绝经期肝郁证的表现。