沙柳SpsLAZY1a、b基因启动子的克隆及表达分析

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shuiwadandan
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LAZY1基因是涉及植物重力反应的重要基因,对植物的分枝角度有重要的调节作用。LAZY1基因功能及机制已有一定研究,但有关该基因表达模式的研究较少,且主要在草本植物。因此,深入研究木本植物LAZY1基因的启动子,对于解析该基因的表达模式及上游调控机制具有重要价值,为后续阐明LAZY1基因的调控机制奠定研究基础。课题组前期由沙柳中克隆获得了SpsLAZY1a和Sps LAZY1b基因的CDS序列,本研究据此克隆了这两个基因的上游启动子序列,预测其包含的顺式作用元件,构建GUS表达载体并进行GUS显色分析,通过5’端缺失构建4个启动子缺失片段的表达载体并转化84K杨,对获得的转基因株系进行GUS组织特异性和表达活性分析,主要结果如下:(1)获得SpsLAZY1a、Sps LAZY1b基因的启动子序列,长度分别为1375 bp和1411 bp。预测发现这两个启动子包含许多相同的顺式作用元件,主要为光响应元件(G-box、Box 4、GATA-motif),茉莉酸甲酯响应元件(CGTCA-moti、TGACG-motiff),脱落酸响应顺式作用元件ABRE,低温顺式作用元件LTR,乙烯应答元件ERE和赤霉素响应元件P-box。(2)对Pro SpsLAZY1a::GUS和Pro Sps LAZY1b::GUS载体的瞬时转化结果和GUS酶活分析结果表明,SpsLAZY1a、Sps LAZY1b启动子都具有启动活性,且SpsLAZY1a启动子的GUS酶活性强于Sps LAZY1b启动子。(3)Pro SpsLAZY1a::GUS和Pro Sps LAZY1b::GUS转化84K杨的显色结果表明,Pro SpsLAZY1a和Pro Sps LAZY1b在顶芽、茎、叶片和根部均出现蓝色显色反应,茎的切片结果显示,SpsLAZY1a启动子的显色反应主要集中在皮层最内侧的细胞和韧皮部。(4)SpsLAZY1a基因启动子序列5’端缺失的4个表达载体的GUS显色和酶活检测结果表明,启动活性随着片段长度的缺失而逐渐减弱。综上结果表明,SpsLAZY1a、Sps LAZY1b基因的启动子是非组织特异性表达启动子,SpsLAZY1a、Sps LAZY1b基因很可能存在功能分化。SpsLAZY1a基因主要在茎的皮层最内侧的细胞和韧皮部发挥其功能,与植物重力反应存在关联。SpsLAZY1a启动子序列中片段长度的缺失导致其活性降低。本文的研究结果为解析LAZY1基因的上游调控机制提供重要参考。
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