目的：　　研究外源性CHK1基因的表达水平改变对乳腺癌细胞增殖、侵袭及辐射敏感性的影响，并初步探讨CHK1基因的生物学功能及作用机制。　　方法：　　(1)根据GeneBank中CHK1的基因序列，自行设计扩增CHK1基因全长cDNA的引物，将人类全长CHK1cDNA定向克隆至真核细胞表达载体pcDNA3.0中，并采用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定建立好的pcDNA3.0-CHK1重组质粒；(2)采用阳离子脂质体介导的质粒转染法，完成pcDNA3/CHK1载体和pcDNA3“空”载体（作为阴性对照）转染，在含有G418的培养基中筛选CHK1高表达的阳性克隆。采用siRNA基因沉默法，下调CHK1基因在乳癌中的表达水平。采用RT-PCR和Western Blot检测克隆细胞中CHK1mRNA和蛋白表达水平；(3)采用细胞计数法观察CHK1转染后，对体外培养的乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖的影响，并通过计数siRNA转染后乳癌细胞的生长情况加以验证；(4)采用划痕实验和Boyden小室法观察CHK1转染后，乳癌细胞MCF-7及MDA-MB-231的侵袭能力改变；(5)细胞接受不同剂量的X射线照射后，采用克隆形成实验检测CHK1对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞辐射敏感性的影响；(6)采用流式细胞术分析CHK1对乳腺癌MCF-7细胞周期进程的影响；Western Blot法检测CHK1对调控细胞周期、DNA损伤修复相关基因或蛋白表达水平的影响。　　结果：　　(1)经限制性内切酶酶切和DNA序列分析证实CHK1真核表达载体构建成功；(2)经RT-PCR和Western Blot证实G418筛选得到的阳性克隆中CHK1高表达及siRNA转染株中CHK1表达的下调；(3)细胞生存曲线提示，结果表明在CHK1高表达的乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞中，细胞增殖明显加快。而在siRNA转染株中，MCF-7和MDA-MB-231的增殖受到明显抑制；(4)划痕实验和Boyden小室法结果显示高水平CHK1明显增强了乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞的侵袭能力；(5)克隆形成实验的结果说明CHK1高表达可降低乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞对X射线的辐射敏感性；(6)流式细胞术分析结果表明CHK1高表达可导致乳腺癌MCF-7在G2/M期的阻滞。(7)Western Blot法检测出CHK1明显增加细胞周期G1期调控因子cyclin D1和β-catenin的表达，降低促凋亡基因Bax的表达，但细胞转移相关抑制蛋白PTEN的表达未见明显改变。　　结论：　　（1）外源性CHK1基因转染提高CHK1表达水平可以促进乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖，作用机制除了包括CHK1其本身高表达引起G2/M阻滞，增加DNA修复，减少凋亡以外；可能还与其增加cyclin D1的蛋白表达，从而促进更多细胞越过G1期，阻滞于G2/M期。　　（2）CHK1高水平表达还可明显增强乳腺癌MCF-7/MDA-MB-231细胞的侵袭能力，这可能与激活Wnt通路中β-catenin的表达，降低肿瘤细胞的“粘附性”有关。　　（3）CHK1高表达可以下调凋亡相关蛋白Bax表达，但未见周期相关蛋白p53的表达改变。CHK1降低乳腺癌MCF-7细胞的辐射敏感性，其机制可能通过ATM-ATR-CHK1-CHK2通路，诱导明显的G2期阻滞，并通过Bax的下调抑制凋亡的发生。　　以上实验结果表明：CHK1是影响乳腺癌细胞的增殖、侵袭以及放疗疗效的重要的调节基因。本实验为将来进一步深入研究CHK1的生物学功能提供了必要的研究基础和实验依据。