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目的：
采用Taqman-MGB探针技术，建立双重荧光实时定量逆转录聚合酶链反应(duplexFQ-RT-PCR)，对前列腺癌患者外周血DD3mRNA和PSAmRNA同时进行定量检测，并进行初步临床应用评价。
方法：
1.根据Genebank的DD3mRNA和PSAmRNA序列，分别在DD3基因的外显子1和3、PSA基因外显子1和2之间设计一对引物，DD3基因和PSA基因的TaqMan-MGB探针分别标记FAM和HEX荧光素，优化反应体系，建立双重荧光实时定量RT-PCR方法。
2.对本方法进行方法学评价，包括探针稳定性、灵敏度、特异性和精密度等。
3.用双重荧光实时定量RT-PCR方法对49例前列腺癌(PCa)和71例前列腺增生(BPH)患者外周血DD3mRNA和PSAmRNA同时进行定量检测，并对DD3mRNA和PSAmRNA诊断PCa的临床应用价值进行评价。
4.以发射式计算机断层显像(emissioncomputedtomography，ECT)检查结果作为PCa微转移的金标准，对DD3mRNA和PSAmRNA诊断PCa微转移的临床应用价值进行评价。
结果：
1.成功建立了双重荧光实时定量RT-PCR同时检测DD3mRNA和PSAmRNA的方法，本方法的DD3mRNA和PSAmRNA最低检测限分别为30拷贝/ml和200拷贝/ml，DD3mRNA批内和批间变异系数分别为0.68％～1.25％和1.52％～3.51％，PSAmRNA批内和批问变异系数分别为0.99％～1.51％和2.01％～2.19％。扩增产物经证实分别为DD3mRNA和PSAmRNA的特异性片段。
2.PCa患者外周血DD3mRNA和PSAmRNA含量明显高于BPH患者，差异有统计学意义(P＜0.01)。PCa组外周血DD3mRNA和PSAmRNA的阳性率随临床分期、Gleason评分增高而增加。而且随临床分期增加，外周血DD3mRNA和PSAmRNA含量均增高，差异有统计学意义(P＜0.01)；随着Gleason评分增高，PSAmRNA含量也显著增高(P＜0.01)；DD3mRNA含量随着Gleason评分增高也有升高趋势，但各组间外周血DD3mRNA含量差异无统计学意义(P＞0.05)。
3.ROC曲线显示当DD3mRNA和PSAmRNA临界值分别为846拷贝/ml和280拷贝/ml时，敏感性分别为69.4％和81.7％，特异性分别为90.1％和77.5％。若将DD3mRNA和PSAmRNA联合用于PCa的诊断，特异性为76.1％，其敏感性可增至85.8％。
4.以发射式计算机断层显像检查(ECT)为微转移的金标准，ROC曲线显示当DD3mRNA和PSAmRNA临界值分别为为609拷贝/ml和908拷贝/ml时，敏感性均为90.9％，特异性分别为84.7％和30.8％；若将DD3mRNA和PSAmRNA联合用于PCa微转移的诊断，敏感性为90.9％，其特异性可增至92.3％。
结论：
1.成功建立了双重荧光实时定量RT-PCR同时检测DD3mRNA和PSAmRNA的方法，具有较高的灵敏度和特异性，且节省反应时间、降低研究成本，具有较好的应用前景。
2.外周血DD3mRNA和PSAmRNA定量检测是诊断前列腺癌的良好指标，外周血DD3mRNA是诊断PCa发生血行微转移的良好指标。
3.外周血DD3mRNA和PSAmRNA两者联合检测更有利于PCa的诊断和PCa微转移的早期发现。