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钙/钙调素依赖蛋白激酶II(CaMKII)是一类多功能的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它在调控细胞内钙信号、细胞生长和细胞凋亡的过程中发挥了关键的作用。在哺乳动物心脏中,CaMKII主要为定位在胞核内的CaMKII—δB亚型和胞浆中的CaMKII—δC亚型。之前的研究证明CaMKII—δC在多种刺激因素诱导的心肌细胞凋亡中发挥了关键的作用,而在心脏中表达更丰富的CaMKII—δB在心脏中的主要功能却不清楚。
本研究证明CaMKII—δB对氧化应激诱导的心肌凋亡具有明显的抑制作用。首先,H2O2刺激引起的氧化应激导致CaMKII—δB的表达显著下降而CaMKII—δC的表达增加。DNA片段化检测和Hoechst染色的方法证实,H2O2刺激可以诱导明显的心肌细胞凋亡,而过表达CaMKII—δB后,H2O2诱导的心肌凋亡效应被显著地抑制。与此相反,过表达CaMKII—δC增强了氧化应激引起的心肌凋亡效应。基因芯片比较分析,Real—time PCR和Western Blot的检测结果表明,过表达CaMKII—δB,而非CaMKII—δC,可以上调两种热激蛋白——诱导型热激蛋白70(iHSP70)和睾丸特异热激蛋白(Hst70)在心肌细胞的表达。用siRNA抑制iHSP70的表达后,CaMKII—δB介导的心肌细胞保护效应被显著地削弱,而基因沉默Hst70对此没有影响,表明iHSP70对CaMKII—δB的心肌保护作用是必需的。热休克因子1(HSF1,Heat Shock Factor1)是包括iHSP70在内的热激蛋白家族的主要转录因子。结果证明,CaMKII—δB通过磷酸化核内HSF1的230位丝氨酸激活HSF1的转录活性,促进iHSP70的表达。
与定位于胞浆中的CaMKII—δC不同,定位于胞核的CaMKII—δB通过磷酸化激活转录因子HSF1,促进iHSP70的表达从而显著抑制氧化应激引起的心肌细胞凋亡,这为临床增强心肌保护,治疗缺血性心脏病提供了新的潜在药物靶点。