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目的:通过将携带自分泌运动因子(AMF)基因的成肌细胞自体移植到神经植入术后的大鼠腓肠肌,观察神经肌肉功能的恢复情况,从而验证作为肿瘤相关因子,AMF能否促进终板再生和神经肌肉功能的修复;为AMF的应用性研究和神经植入术后神经肌肉功能的改善提供实验依据。方法:1、原代培养大鼠成肌细胞,鉴定后纯化并扩增;2、构建携带AMF及eGFP基因的慢病毒载体,经鉴定后,转染原代培养的成肌细胞,并对后者表达的AMF进行生物学活性鉴定;3、建立大鼠腓肠肌失神经支配及神经植入术模型,并分为A组(未经转染的成肌细胞)、B组(携带AMF基因和eGFP基因的成肌细胞)、和C组(空白载体转染的仅携带eGFP基因的成肌细胞);于神经植入术后第0天、第7天,将每只大鼠对应的自体成肌细胞,注射移植于腓肠肌内;4、成肌细胞移植后第8、16、24周,腓肠肌冰冻切片观察成肌细胞的存活情况;测定胫神经功能指数(TFI)和神经电生理指标,后者包括复合肌肉动作电位(CMAP)的峰峰值(PPV)、曲线下面积(AUC),并计算神经传导速度(NCV);24周后通过AchE染色计数单位面积内终板数量,并观察腓肠肌组织形态学改变。结果:1、经过21天的原代培养及纯化,1cm3肌肉可获得纯度为98.0%的成肌细胞,平均5.6×106个;2、构建了携带AMF和eGFP基因的慢病毒载体并成功转染成肌细胞,最佳转染复数(MOI)为100。Transwell实验证实:受AMF刺激后48小时内穿过聚碳酸酯膜的NIH-3T3细胞为159±23.5个/视野,较对照组(94.6±36.1个/视野)明显增多(P<0.05),说明转染后的成肌细胞能表达有活性的AMF;3、成功建立大鼠腓肠肌失神经支配及神经植入术模型,成肌细胞移植后第8、16、24周均在腓肠肌中观察到成肌细胞存活;4、移植后8、16、24周,TFI(A组:-69.3±11.8,-46.5±8.0,-33.6±9.1;B组:-57.5±9.1,-36.8±7.1,-25.2±6.4;C组:-67.7±8.2,-49.7±9.2,-34.2±8.7)、PPV(A组:8.5±2.3mV、29.5±7.4%,12.4±2.4mV、40.4±7.1%,18.6±2.9mV、62.5±9.3%;B组:11.8±1.9mV、39.0±5.2%,15.0±1.6mV、39.0±5.2%,22.1±1.5mV、39.0±5.2%;C组:8.7±1.5mV、30.0±5.4%,11.5±1.8mV、39.2±6.2%,18.1±1.7mV、60.9±5.4%)、AUC(A组:10.5±2.1mV*ms、33.0±5.9%,13.7±2.5mV*ms、41.2±6.8%,19.0±3.4mV~*ms、60.5±8.6%;B组:13.6±2.1mV~*ms、40.9±7.3%,16..8±3.1mV~*ms、50.7±9.3%,23.0±1.7mV~*ms、72.3±6.7%;C组:9.6±2.6mV*ms、31.3±8.1%,13.7±2.9mV~*ms、42.4±9.9%,18.2±2.1mV~*ms、59.4±6.7%)测定和终板计数(A组:90.1±15.1/切片;B组:120.7±18.6/切片;C组:86±16.4/切片)显示:B组明显高于A、C组(P<0.01),说明携带AMF基因的成肌细胞自体移植,能明显促进神经肌肉功能的恢复;而A、C组之间无显著差异(P>0.05),说明eGFP空白载体的转染对成肌细胞和实验结果均无影响。NCV测定在本研究中则不具有可靠的意义(P<0.05或P>0.05);腓肠肌标本HE染色未见组织结构和细胞有异型性倾向。结论:携带AMF基因的成肌细胞自体移植,能有效地促进大鼠腓肠肌神经植入术模型的神经肌肉功能的恢复和终板的再生,未见明显副作用。AMF有望在周围神经再生微环境扮演重要角色,为肿瘤基因的治疗性应用开辟道路,提高神经再生的效能。