论文部分内容阅读
目的探讨成年大鼠嗅鞘细胞(Olfactory ensheathing cells, OECs)的分离与纯化培养方法。并探讨嗅球成鞘细胞(OECs)移植对周围神经损伤后再生的促进作用。方法取材后用差速贴壁和阿糖胞苷(arabinosyl cytosine, Ara-c)抑制相结合的纯化培养方法培养嗅鞘细胞,分不同阶段进行观察,并行胶质纤维酸性蛋白(glial fiber acidic protein, GFAP)和神经生长因子受体(nerve growth factor receptor p75, NGFRp75)免疫组化染色鉴定。将Wister大鼠30只随机分成生理盐水组(阴性对照组),嗅鞘细胞(OECs)组,甲钴胺组(阳性对照组),钳夹各组大鼠右侧坐骨神经制作坐骨神经损伤模型,用微量注射器分别于神经损伤处注射药物,生理盐水组注射生理盐水10ul,嗅鞘细胞组注入10μl细胞悬液,甲钴胺(methylcobalamin)组注射甲钴胺10ul (0.5mg/ml),彻底止血后逐层关闭切口。分别于术后1周,2周,3周,4周,观察大鼠坐骨神经功能指数(sciatic function index, SFI),并于4周时处死大鼠,取小腿三头肌称湿重,测量三头肌湿重恢复率。结果采用改良的Nash差速贴壁法培养嗅鞘细胞1天后,加入Ara-c5μmol/L作周24-48小时,能够培养出足够数量且纯度较高的嗅鞘细胞。术后各组1周、2周、3周、4周坐骨神经指数均有恢复,但嗅鞘细胞(OECs)组及甲钻胺组指数较生理盐水组恢复明显,差异有显著性意义(P<0.01),嗅鞘细胞(OECs)组与甲钴胺组指数差异无统计学意义。术后4周取小腿三头肌湿重,将损伤侧重量与对侧对比,甲钴胺组为0.7628±0.4295,嗅鞘细胞组为0.7652±0.5630,生理盐水组为0.7052±0.0525,前两者与后者差异有显著性意义(P<0.01),前两者之间差异无统计学意义。结论差速贴壁和Ara-c抑制相结合的纯化培养方法是一种简单经济而又有实效的嗅鞘细胞培养方法。且培养的嗅球成鞘细胞对周围神经损伤后的神经功能恢复有积极的促进作用。