目的:利用分子生物学、细胞生物学方法,在体外系统观察新型mTOR激酶抑制剂CZ415的抗OS作用;明确CZ415抗OS作用的分子机制;在此基础上,建立裸鼠荷瘤模型,观察口服CZ415在体抗OS细胞活性。本研究旨在明确CZ415抗OS作用和分子机制。方法:体外细胞实验1)MTT(四甲基偶氮唑蓝)法、克隆形成试验(Clonogenicity assay),BrdU ELISA法检测CZ415处理不同时间后,对人骨肉瘤(osteogenic sarcoma,OS)细胞存活、死亡、增殖及细胞周期的影响;2)Caspase-9活性检测法、组蛋白DNA ELISA法、TUNEL染色法检测CZ415对人OS细胞凋亡的作用;3)碘化丙啶染色(PI)流式细胞仪(FACS)法检测CZ415对人OS细胞周期的影响;4)CZ415处理OS细胞后使用Western blot方法检测mTOR、ERK等信号通路活化水平;5)通过药理学和shRNA方法抑制ERK通路活化,观察ERK通路抑制后CZ415抗OS细胞活性的变化。动物体内实验6)建立裸鼠荷瘤模型,观察口服CZ415,或同时给予ERK抑制剂MEK162,研究CZ415在体抗OS的活性。结果:体外细胞实验1)CZ415抑制人OS细胞株及原代人OS细胞存活和增殖;2)CZ415显著诱导人OS细胞凋亡;3)CZ415干扰OS细胞周期进程,诱导细胞G1-S期停滞;4)CZ415阻断OS细胞中mTORC1和mTORC2的活化;5)药理学抑制ERK或shRNA稳定敲减ERK1/2增加U20S细胞对CZ415的敏感性。动物体内实验6)在SCID小鼠中,CZ415 口服给药会抑制U2OS肿瘤生长。MEK162的共同给药会使其活性进一步加强;7)CZ415给药的肿瘤组织内AKT-mTOR活性显著下降。MEK162的共同给药同时阻断ERK的活化。结论:ERK抑制增敏CZ415诱导的抗人OS细胞的活性。