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本文研究了联合应用微卫星标记共享等位基因分析、多重连接探针扩增(Multiplex Ifigation-Dependent Probe Amplification，ML,PA)、变性高效液相色谱(Denaturing High．Performance Liquid．Chromatography，DHPLC)技术检测NF1基因突变，试图建立一个准确和高效的NF1基因诊断技术平台。
首先在NF1基因内部和上下游选择9个微卫星多态标记，在家系中进行等位基因分析，通过确定患者间是否共享等位基因初步确认家系中疾病表型是否与NF1基因连锁，同时检测NF1患者的瘤体组织有无杂合性缺失。由于NF1患者中有5％的个体存在整个NF1基因的缺失，应用MLPA SALSA P122试剂盒进行NF1基因缺失/重复的检测。该试剂盒覆盖了NF1基因内部的第1、12b、23-2、40和48外显子及NF1基因附近的7个位点，同时还包含17个其它染色体位点的探针作为参照，可检测NF1整个基因的拷贝数改变。在MLPA排除NF1整个基因缺失的基础上进一步进行点突变的检测。设计了覆盖NF1基因全部60个外显子以及外显子/内含子交界区的引物，通过PCR方法扩增获得特异性片段，进一步采用DHPLC筛查NF1基因突变并对可能存在突变的片段进行PCR产物直接测序。本研究利用收集到的3个NF1家系和2例散发NF1患者进行等位基因分析和致病基因突变检测。通过家系中不同患者间共享微卫星标记等位基因的分析，发现两个家系中的神经纤维瘤可能与NF1基因的突变有关。比较患者外周血基因组DNA与瘤体组织基因组DNA间等位基因，结果显示瘤体组织中无杂合性缺失，提示未发生NF1整个基因的缺失。采用MLPA技术对患者外周血基因组DNA和/或瘤组织基因组DNA进行外显子拷贝数分析，在4名患者中均未发现NF1基因内外显子的拷贝数变化。通过DHPLC筛查NF1基因全部外显子，在两个NF1家系的先证者中和另外两名散发病人的NF1基因的多个片段中发现存在DHPLC异常洗脱峰。进一步对相应PCR产物进行测序，在家系1先证者中检出NF1基因第31外显子的错义突变c.5854T>C，突变导致神经纤维瘤蛋白第1952位色氨酸被精氨酸取代，即p．W1952R。该错义突变在国内外文献中尚未见报道，为新的致病突变。其它异常洗脱峰均为己知的单核苷酸多态所致。
综上所述，本研究建立了基于DHPLC和MLPA的Ⅰ型神经纤维瘤病基因诊断技术体系，发现一种新的NF1基因错义突变。研究工作对开展Ⅰ型神经纤维瘤病的基因诊断和产前诊断有重要意义。