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目的:1)研究新疆阿克苏地区阿瓦提县维吾尔族人群血栓闭塞性脉管炎(TAO)的流行病学状况分析导致疾病的危险因素;2)筛选维吾尔族血栓闭塞性脉管炎的易感SNP及易感基因,分析可能参与疾病的生物学过程及可能的通路;3)结合危险因素及全基因组关联分析结果进行体外验证,研究可替宁处理下的HUVEC,TLR-4/MyD88介导的免疫炎症通路与血栓闭塞性脉管炎发生调控的机制。方法:第一部分:对新疆阿克苏地区阿瓦提县常住维吾尔族人口进行抽样调查,结合流行病学调查问卷、体格检查、血液检查及超声造影检查结果,分析人群的环境因素个人习惯与血清可替宁、白介素-6、17(IL-6,IL-17)、肿瘤坏死因子(TNF-α)浓度进行测定。所获资料根据资料的类型计算单因素危险因素并计算患病率,研究该病的影响因素;将结果纳入多因素条件logistic回归模型进行多因素分析,综合分析环境危险因素。第二部分:选择维吾尔族患者80名为病例组,年龄在20~47岁之间;对照组选取同样遗传背景的维吾尔族正常人群按照1∶1对照配比。样本基因型检测采用全基因组Affymetrix Genome-Wide Human SNP Array 6.0芯片。通过质量控制及分析,确定维吾尔族人群发病的易感SNP。对易感SNP所在基因及上下游相关基因进行富集分析,找到富集差异基因的Pathway条目,寻找差异基因可能的功能和细胞通路。第三部分:体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),复苏,传代,进行细胞鉴定,检测,达到稳态。进行MTT实验,使用可替宁处理细胞,摸索可替宁的处理浓度。将细胞分为正常对照可替宁1ug和100ug/ml处理条件;使用QPCR技术检测可替宁处理HUVEC的TLR-4总蛋白及细胞表面蛋白表达;使用ELISA方法检测可替宁处理下的细胞培养液中TNF-α和IL-6浓度变化;使用western-blot方法检测NF-κB和IκB-α蛋白水平的变化。综合分析可替宁对HUVEC TLR-4的表达及TLR-4/MyD88/NF-κB炎症信号通路的活化。结果:第一部分:1)成功对新疆阿克苏地区阿瓦提县进行了血栓闭塞性脉管炎相关的流行病学调查;阿瓦提县血栓闭塞性脉管炎的患病率为8.7%,全部为维吾尔族男性;2)收入(P<0.05),吸烟量(X2=13.48,P<0.05),疾病史(P<0.05),对寒冷的耐受程度(X2=941.30,P<0.05),四肢缺血病史(X2=769.67,P<0.05),游走性静脉炎(X2=523.11,P<0.05),间歇性跛行史(X2=489.89,P<0.05),四肢末端疼痛及坏疽(X2=331.48,P<0.05),足背动脉搏动(P<0.05),血清可替宁浓度(Z=16.17,P<0.05),血清IL-6浓度(Z=15.60,P<0.05),血清IL-17浓度(Z=12.76,P<0.05),血清TNF-α浓度(Z=11.57,P<0.05)与对照组差异有统计学意义,是疾病的影响因素;3)经过筛选后的多因素logistic回归分析后发现血清可替宁水平(X2=14.45,P<0.05,OR=20.25,95%CI:3.96-145.38)与疾病的关联性很明显,是疾病的危险因素。第二部分:1)经过严格的质量控制后,本节共研究包含70例维吾尔族患者,64例正常维吾尔族对照的484730个常染色体SNP的TAO全基因组关联分析数据库。该数据库病例-对照样本匹配良好。发现26个SNP为TAO的易感位点,同时筛选出这26个易感SNPs所在的基因及附近的基因共84个基因;2)TAO易感SNP主要富集于:细胞粘附,生物粘附,细胞与细胞间粘附,细胞真菌起源的分子应答,调节细胞组件大小,细胞内的信号级联,肿瘤坏死因子生成的正向调控,模式识别受体信号通路,激活先天性免疫,先天性免疫激活反应等生物学过程。第三部分:1)可替宁对HUVEC细胞增殖没有显著的影响,而1000 ug/ml对细胞的抑制影响可能由于药物浓度过大(P<0.05);2)可替宁处理对HUVEC迁移无显著影响(P<0.05);3)可替宁处理下可显著抑制TLR-4 mRNA表达(P<0.05);4)可替宁处理下对TLR-4蛋白表达没有显著的影响(P<0.05);5)可替宁处理下,HUVEC细胞TLR-4上膜的比例在3h和24h显著增加。可替宁可能通过增加TLR-4上膜比例,进一步激活TLR-4介导的炎症相关信号通路(P<0.05);6)经过可替宁处理可显著减少IκB-α表达,进而使得NF-κB表达,从而激活NF-κB信号通路(P<0.05);7)可替宁可显著增加胞外TNF-α和IL-6的分泌(P<0.05)。结论:第一部分:1)不同民族和性别之间的TAO患病率存在差异,维吾尔族TAO的患病率高于汉族,男性高于女性;2)TAO患病率与血清可替宁浓度,血清IL-6浓度,血清IL-17浓度,血清TNF-α浓度关系密切。收入,吸烟量,疾病史,对寒冷的耐受程度,四肢缺血病史,游走性静脉炎,间歇性跛行史,四肢末端疼痛及坏疽,足背动脉搏动,与TAO的联系精密。TAO与可替宁代谢,内皮细胞损伤,炎症因子释放,雌激素水平有关,是自身免疫性炎症疾病的组成成分。第二部分:1)本研究在维吾尔族人群中进行了一次全基因关联分析,报道了26个血栓闭塞性脉管炎的易感SNP,讨论了血栓闭塞性脉管炎与免疫性炎症的关系,强调了粘附因子和炎症因子在发病中的重要作用,为进一步结石发病机制提供了理论基础,但是需要后期的重复验证;2)用生物信息学分析工具对血栓闭塞性脉管炎的易感SNP进行功能富集分析发现三条与疾病相关的重要信息(一条通路,粘附因子,IL-17炎症因子)。为该病的病因学研究提供了重要线索。第三部分:1)可替宁增加HUVEC膜表面TLR-4 RNA表达;2)可替宁活化HUVEC炎症相关信号通路;3)可替宁激活HUVEC的TLR-4/MyD88/NF-κB炎症信号通路。