LncRNA-Co7Rik的表达特征及其在肝脏糖异生中作用的探讨

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目的:探讨长链非编码RNA(Longnon-coding RNA,LncRNA)Co7Rik的表达特征及其在肝脏糖异生中的作用。方法:1)构建饥饿-再进食模型及高脂饮食诱导的肥胖小鼠模型,RT-PCR法检测LncRNA-Co7Rik的表达水平;2)取小鼠心、肝、脾、肺、肾等不同部位的组织,RT-PCR法检测LncRNA-Co7Rik的组织表达规律;3)利用UCSC基因组浏览工具对LncRNA-Co7Rik的序列进行分析,并且使用核酸电泳对其序列进行鉴定;4)分离培养小鼠肝脏原代细胞,给予二丁酰环腺苷酸(db-cAMP)、腺苷酸环化酶激活剂(Forskolin)、地塞米松(Dexamethasone)、氢化可的松(Hydrocortisone)四种不同的生糖信号分子刺激,RT-PCR法检测LncRNA-Co7Rik的表达变化;5)利用核质分离的技术,检测LncRNA-Co7Rik的亚细胞定位。结果:1)饥饿-再进食模型结果显示:LncRNA-Co7Rik在饥饿0h、2h、5h、16h及再进食 20 h 的表达量分别为 1.00±0.61、2.98 ± 0.87、3.41±0.98、6.73±1.21、1.53 ± 0.78(均P<0.05),表明LncRNA-Co7Rik的表达水平会随着饥饿时间的延长而显著升高,且在再进食扣可接近饥饿前水平;2)高脂饮食诱导的肥胖小鼠肝脏中LncRNA-Co7Rik的表壳较正常对照组明显升高(1.00±0.21 vs 2.92±0.63,P<0.01),提示LncRNA-Co7Rik对病理性的糖异生具有调控作用;3)小鼠不同组织的定量结果表明LncRNA-Co7Rik在肝脏组织中特异性高表达,表达量是其他的3-4倍(P<0.05);4)小鼠LncRNA-Co7Rik序列所在的染色体区域为Chr8qa1.1,全长1202bp,且利用核酸电泳后测序发现与数据库中序列一致,证实这段序列是真实存在的;5)利用二丁酰环腺苷酸、腺苷酸环化酶激活剂、地塞米松及氢化可的松四种生糖信号分子刺激原代肝细胞,结果表明LncRNA-Co7Rik的表达明显上调,且具有时间依赖性,提示LncRNA-Co7Rik可能参与糖异生的生理及病理过程;6)核质分离结果表明LncRNA-Co7Rik在细胞核和细胞质中均有分布,但主要分布于细胞核中,提示LncRNA-Co7Rik可能在基因转录水平发挥作用。结论:LncRNA-Co7Rik是一个肝脏特异性的长链非编码RNA,且受生糖信号的调控,并可能参与糖异生的生理及病理过程。
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