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本课题通过PCR-DGGE技术,对Kefir粒的菌相构成进行研究,并对Kefir发酵过程中微生物变化进行动态监控。利用分子生物学技术与实验室前期对Kefir传统菌种分离、鉴定的结果,分析植物乳杆菌MA2在发酵过程中的动态变化。对其体外降胆固醇功能进行了研究,并对制备发酵剂的喷雾干燥的条件及喷雾干燥保护剂进行优化,通过喷雾干燥将其制备成益生菌发酵剂。所得实验结果如下: 通过PCR-DGGE分析,发现Kefir粒中有9种细菌和4种真菌处于优势地位。Kefir发酵过程中,细菌菌相变化明显,12h到16h时Kefir中细菌的种类和数量最多,细菌种类可达9种,其中3种细菌伴随着整个发酵过程,发酵过程中细菌种群结构的相似性为70%-83%;真菌在发酵过程中菌相比较稳定,有3种真菌在发酵过程中始终处于优势菌群,发酵过程中真菌种群结构的相似性为80%-87%。 对MA2的DGGE电泳结果显示,该菌在Kefir发酵过程中处于优势地位。对MA2进行了体外降胆固醇实验,其胆固醇移除率与菌体密度呈正相关,在胆固醇浓度为30mg/100mL的MRS培养基中,其胆固醇移除率为46.8%。 通过正交实验优化喷雾干燥保护剂,确定保护剂配方为:谷氨酸钠2%,海藻糖5%,乳糖5%,脱脂奶10%。通过响应面分析对喷雾干燥条件进行优化,确定了喷干最适条件:进风温度152℃,进料流速62mL/h,保护剂菌泥比例3.4∶1。按上述实验条件得到喷雾干燥得到干菌粉的活菌数为2.11×109cfu/g,凝乳时间12h,胆固醇移除率40.6%;4℃冷藏六个月后,干菌粉的活菌数为1.02×109cfu/g,凝乳时间14h,胆固醇移除率32.0%。与冻干菌粉相比,保藏期、活菌数和功能特性较为接近,但成本只相当于冻干的65%,更适合与发酵剂的大规模生产。