在病毒疫苗的生产过程中,常利用生物反应器大规模培养动物细胞用于病毒繁殖。目前国内细胞株开发水平落后于国外,这阻碍了新疫苗品种的开发和疫苗生产效率的提高。本论文针对动物疫苗生产细胞株开发中的两个关键问题:细胞悬浮培养和细胞对病毒的广谱性。利用RNA-Seq、siRNA和基因过表达载体构建等技术,一方面探索影响细胞悬浮生长的关键基因,另一方面拓展细胞的广谱性,解决细胞对部分病毒不敏感的问题,为将来构建新型全悬浮广谱疫苗生产细胞株打下基础。主要研究成果如下:(1)通过对BHK-21和CHO-K1细胞的转录组分析,筛选出18个贴壁和悬浮细胞之间的显著差异基因,发现其主要与基因转录和翻译相关。使用GeneMANIA构建生物网络确定了18个基因中最关键的基因PABPC1,并发现抑制PABPC1的表达能够促进BHK-21细胞的悬浮生长。(2)构建了犬瘟热病毒受体NECTIN4的真核表达载体并转化牛肾细胞MDBK,获得稳定表达NECTIN4蛋白的细胞株。发现转入病毒受体基因并表达有利于相应病毒感染,能够拓展细胞对病毒的广谱性。