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[目的]本研究建立了体内与体外两种由脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤模型,通过体内、体外各项实验,研究冷暴露对LPS诱导的急性肺损伤的影响及冷暴露加重急性肺损伤与Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核转录因子-KB(Nuclear factor-KB,NF-KB)信号通路的关系,为寒冷地区感染引起急性肺损伤的预防和治疗提供理论依据。[方法]1.体内实验:40只清洁级BALB/c健康雄性小鼠随机分为4组,每组10只,分别为对照组(Control组),冷暴露组(Cold组),脂多糖组(LPS组),冷暴露+脂多糖组(Cold+LPS组),其中LPS组和Cold+LPS组小鼠鼻滴LPS溶液(0.01M,PBS做溶剂)5mg/kg体重,Control(Con)组和Cold组鼻滴等体积无菌PBS溶液,滴鼻后将Con组及LPS组小鼠置于室温环境下,Cold组及Cold+LPS组小鼠置于4℃低温实验室中,6小时后观察各组小鼠生存状态和存活率;蛋白免疫印迹法测定肺组织中TLR4、NF-κB蛋白表达水平;酶联免疫吸附法(Enzyme-linked imnuinosorbent assay,ELISA)检测肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中肿瘤坏死因子-α(Tumornecrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Interlukin-6,IL-6)含量;测定BALF中蛋白总浓度、白细胞数;肺组织称重计算肺湿/干(Wet/Dry,W/D)重比;苏木精-伊红(Hmatoxylin eosin,HE)染色观察肺组织病理学改变。2.体外实验:将A549细胞分为对照组(Con组)、冷暴露组(Cold组)、脂多糖组(LPS组)、冷暴露+脂多糖组(Cold+LPS组),其中LPS组、Cold+LPS组细胞加1 μg/ml LPS,然后将Con组与LPS组置于室温中,Cold组与Cold+LPS组置于4℃低温实验室中,6小时后通过蛋白免疫印迹法测定细胞中TLR4、NF-κB蛋白表达水平;ELISA法检测各组细胞上清液中炎症因子TNF-α、IL-6含量。[结果]1.小鼠生存状态及存活率:Con组与Cold组小鼠饮食正常,活动良好,呼吸平缓;LPS组小鼠生存状态相对较差,饮食减少,活动减少,呼吸急促;Cold+LPS组状态最差,饮食活动极少且呼吸窘迫。2.小鼠肺组织中TLR4、NF-κB(p65)蛋白表达水平:Cold组与Con组相比没有显著性差异(P>0.05);LPS组与Con组、Cold+LPS组与Cold组以及Cold+LPS组与LPS组相比,二者蛋白表达水平均增加(P<0.05)。3.小鼠BALF中TNF-α、IL-6含量:Cold组与Con组相比没有显著性差异(P>0.05);LPS 组与 Con 组、Cold+LPS 组与 Cold 组以及 Cold+LPS 组与 LPS组相比,二者含量均增加(P<0.05)。4.小鼠BALF中总蛋白浓度、白细胞数:结果显示Cold组与Con组相比没有显著性差异(P>0.05);LPS组与Con组、Cold+LPS组与Cold组及Cold+LPS组与LPS组相比,二者均增高(P<0.05)。5.肺组织湿干比重(W/D):Cold组与Con组相比没有显著性差异(P>0.05);LPS组与Con组、Cold+LPS组与Cold组及Cold+LPS组与LPS组相比,肺组织湿干比重增加(P<0.05)。6.肺组织病理学改变:肺组织HE染色发现Cold组与Con组肺组织无明显的病理改变,但LPS组与Cold+LPS组均出现了炎性细胞浸润、肺水肿、肺泡出血、肺泡间隔增厚、肺泡结构受损的情况,而且Cold+LPS组与LPS组相比组织病理学改变更为明显。7.A549细胞中TLR4、NF-κB(p65)蛋白表达水平:Cold组与Con组相比没有显著性差异(P>0.05);而LPS组与Con组、Cold+LPS组与Cold组及Cold+LPS组与LPS组相比,二者蛋白表达水平均增加(P<0.05)。8.A549细胞上清中TNF-α、IL-6含量:Cold组与Con组相比没有显著性差异(P>0.05);但 LPS 组与 Con 组、Cold+LPS 组与 Cold 组及 Cold+LPS 组与 LPS组相比,二者含量均增加(P<0.05)。[结论]冷暴露未能诱发明显的急性肺损伤,但可能通过TLR4/NF-κB信号通路加重LPS诱导的急性肺损伤。